ICS 65.100 B 13 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T 31270.18—2014 化学农药环境安全评价试验准则 第18部分：天敌两栖类急性毒性试验 Test guidelines on environmental safety assessment for chemical pesticides- Part 18:Amphibian acute toxicity test 2014-10-10发布 2015-03-11实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T31270.18—2014 前言 GB/T31270《化学农药环境安全评价试验准则》分为21个部分： 第1部分：土壤降解试验； 第2部分：水解试验； 第3部分：光解试验； 第4部分：土壤吸附/解吸试验； 第5部分：土壤淋溶试验； 第6部分：挥发性试验； 一第7部分：生物富集试验； 第8部分：水-沉积物系统降解试验； 第9部分：鸟类急性毒性试验； 第10部分：蜜蜂急性毒性试验； 第11部分：家蚕急性毒性试验； 第12部分：鱼类急性毒性试验； 第13部分：涵类急性活动抑制试验； 一第14部分：藻类生长抑制试验； 第15部分：蜥蚓急性毒性试验； 第16部分：土壤微生物毒性试验； 第17部分：天敌赤眼蜂急性毒性试验； 第18部分：天敌两栖类急性毒性试验； 第19部分：非靶标植物影响试验； 第20部分：家畜短期饲喂毒性试验； 第21部分：大型甲壳类生物毒性试验。 本部分是GB/T31270的第18部分。 本部分按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本部分由中华人民共和国农业部提出并归口。 本部分负责起草单位：农业部农药检定所、环保部南京环境科学研究所。 本部分主要起草人：周军英、曲、单正军、田丰、俞瑞鲜、郝身伟、陈朗。 I GB/T 31270.18—2014 化学农药环境安全评价试验准则 第18部分：天敌两栖类急性毒性试验 1范围 GB/T31270的本部分规定了天敌两栖类急性毒性试验的材料、条件、操作、质量控制、数据处理， 试验报告等的基本要求 本部分适用于为化学农药登记而进行的天敌两栖类急性毒性试验，其他类型的农药可参照使用。 本部分不适用于易挥发和难溶解的化学农药。 2术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2.1 半致死浓度 medianlethalconcentration 在急性毒性试验中，引起50%的供试生物死亡时的供试物浓度，用LC50表示。 注：单位为mga.i./L。 2.2 供试物testsubstance 试验中需要测试的物质。 2.3 化学农药 jchemical pesticide 利用化学物质人工合成的农药。其中有些以天然产品中的活性物质为母体，进行仿制、结构改造， 创新而成，为仿生合成农药。 同义词：有机合成农药syntheticorganicpesticide。 ［NY/T1667.1—2008.定义2.3.1] 2.4 原药technicalmaterial 在制造过程中得到的有效成分及杂质组成的最终产品，不能含有可见的外来物质和任何添加物，必 要时可加入少量的稳定剂。 ［NY/T1667.2—2008,定义2.5.1] 2.5 制剂formulationproduct 由农药原药（或母药）和助剂制成使用状态稳定的产品。 [NY/T1667.2—2008,定义2.4] 2.6 半静态试验法 semi-static test 试验期间每隔一定时间（如24h）更换一次药液，以保持试验药液的浓度不低于初始浓度的80%。 1 GB/T 31270.18—2014 2.7 静态试验法 statictest 试验期间不更换试验药液。 2.8 流水式试验法 flow-through test 试验期间药液连续更新。 3 试验概述 天敌两栖类急性毒性测定方法有静态法、半静态法与流水式试验法三种。应根据供试物的性质采 用适宜的方法。分别配制不同浓度的供试物药液，于96h的试验期间每天观察并记录蝌蚪的中毒症状 和死亡数，并求出24h、48h、72h和96h的LCs值及95%置信限。 4试验方法 4.1 材料和条件 4.1.13 供试生物 推荐使用泽蛙（RanaLimnocharis）或非洲爪蟾（Xenopuslaevis）蝌蚪。具体龄期和适宜水温见附 录A。如果选用其他两栖类作为试验材料，应该采用能够满足其生理要求的相应驯养和试验条件，并加 以说明。 试验用蝌应选用健康无病、龄期一致的蚪。试验前在室内预养3d，试验前一天停止喂食，试验 中亦不喂食。 4.1.2供试物 农药制剂、原药或纯品。对难溶于水的农药，可用少量对蝌低毒的有机溶剂助溶，用量不得超过 0.1 mL(g)/L。 4.1.3主要仪器设备 主要仪器设备如下： 溶解氧测定仪； 一温度计； 一酸度计； 一玻璃缸； 一量简等。 4.1.4试验用水 试验用水为经活性炭处理、存放并曝气处理24h以上的自来水或能注明配方的稀释水。水质硬度 在10mg/L~250mg/L之间（以CaCO：计），pH在6.0~8.5之间，溶解氧含量不应低于空气饱和值 (ASV)的60%。 4.1.5承载量 静态和半静态试验系统最大承载量为1.0g（受试生物）/L，流水式试验系统承载量可高一些。 21G GB/T 31270.18—2014 4.1.6试验条件 光暗比16h：8h，或者自然光照。 4.2 试验操作 4.2.1方法的选择 应根据供试物的特性选择静态试验法、半静态试验法或流水式试验法。如使用静态或半静态试验 法，应确保试验期间试验药液中供试物浓度不低于初始浓度的80%。如果在试验期间试验药液中供试 验法进行试验，以稳定试验药液中供试物浓度。 4.2.2预试验 按正式试验的条件，以较大的间距设置4个～5个浓度组。通过预试验求出蝌最高全存活浓度 和最低全致死浓度。 4.2.3正式试验 在预试验确定的浓度范围内以一定几何级差（不超过2.2）设置5个～7个浓度组，并设一个空白对 照组，使用有机溶剂助溶的增设溶剂对照组，每个浓度设三个重复。每缸放人10只蝌蚪，试验开始后 6h内随时观察并记录试验用蝌蚪的中毒症状及死亡率，其后于24h、48h、72h和96h观察并记录蝌 蚪的中毒症状及死亡率，及时清除死蝌蚪。每天测定并记录试液温度、pH及溶解氧。 4.2.4限度试验 设置上限浓度100mga.i./L，即供试物达100mga.i./L时供试生物死亡率未超过空白对照组，则 无需继续进行试验。若供试物溶解度小于100mga.i./L，则采用其溶解度上限作为试验浓度。 4.3数据处理 4.3.1统计分析方法的选择 可采用寇氏法、直线内插法或概率单位图解法计算每一观察时间（24h、48h、72h和96h）的天敌 两栖类急性毒性的半致死浓度LC50，也可采用数据统计软件进行分析和计算。 4.3.2寇氏法 用寇氏法可求出天敌两栖类在24h、48h、72h、和96h的LC5值及95%置信限。 LCs的计算见式（1)： logLCsa =Xm-i(ZP-0.5) :(1) 式中： X.—最高浓度的对数； i—相邻浓度比值的对数； ZP——各组死亡率的总和（以小数表示）。 95%置信限的计算见式（2）： 95%置信限=logLC50±1.96SlogLC50 .(2) 标准误的计算见式（3)： 3