(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202110949821.X (22)申请日 2021.08.18 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 113855646 A (43)申请公布日 2021.12.31 (73)专利权人 东华大学 地址 201620 上海市松江区松江新城人民 北路2999号 (72)发明人 沈明武　郭云琦　范钰　王志强　 詹梦偲　史向阳　 (74)专利代理 机构 上海泰能知识产权代理事务 所(普通合伙) 3123 3 专利代理师 黄志达 (51)Int.Cl. A61K 9/51(2006.01)A61K 47/46(2006.01) A61K 31/7064(2006.01) A61K 33/34(2006.01) A61K 39/395(2006.01) A61K 47/60(2017.01) A61K 49/18(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 37/04(2006.01) B82Y 5/00(2011.01) B82Y 30/00(2011.01) B82Y 40/00(2011.01) (56)对比文件 CN 110898029 A,2020.0 3.24 US 2006127310 A1,20 06.06.15 审查员 杨琪 (54)发明名称 细胞膜仿生的负载含磷树状大分子铜络合 物/丰加霉素的响应型纳米平台及其制备和应用 (57)摘要 本发明涉及一种细胞膜仿生的负载含磷树 状大分子铜络合物/丰加霉素的响应型纳米平台 及其制备方法和应用。 该方法包括： 1G3‑Cu NPs 溶液制备， 1G3‑Cu/Toy NPs制备， B16细胞膜悬液 CCM制备， 1G3‑Cu/Toy NPs@CCM制备。 该方法反应 条件简单， 易于操作分离， 具有良好的发展前景； 制备的还原响应型载双药纳米平台有效改善了 1G3‑Cu的水溶性并降低了Toy的毒副作用， 可在 肿瘤微环境响应解离释放1G3‑Cu及Toy， 为构建 安全、 智能、 高效的药物载体提供了新思路。 权利要求书1页 说明书14页 附图12页 CN 113855646 B 2022.11.04 CN 113855646 B 1.一种细胞膜仿生的负载含磷树状大分子铜络合物/丰加霉素的响应型纳米平台， 其 特征在于， 利用两亲性聚合物PEG ‑SS‑PCL将第三代含磷树状大分子铜络合物1G3‑Cu包封在 疏水端， 并通过 氢键作用将丰加霉素Toy负载在亲 水端， 然后包覆黑色素瘤 B16细胞膜获得。 2.一种细胞膜仿生的负载含磷树状大分子铜 络合物/丰加霉素的响应型纳米平台的制 备方法， 包括以下步骤： (1)将第三代含磷 树状大分子铜络合物1G3‑Cu和PEG‑SS‑PCL溶解在溶剂中， 超声条件下 逐滴加入 超纯水中， 搅拌 反应， 透析， 过 滤， 离心， 得到1G3‑Cu NPs溶液； (2)将丰加霉 素Toy溶解在超纯水中， 加入到步骤(1)中1G3‑Cu NPs溶液中， 搅拌反应， 离 心， 得到1G3‑Cu/Toy NPs； (3)将细胞裂解混合液加入到黑色素瘤B16细胞沉淀中， 冰浴， 反复冻融， 离心， 得到的 沉淀为B16细胞膜， 然后重悬于PBS溶 液得到B16细胞膜悬 液CCM； (4)将步骤(2)中1G3‑Cu/Toy NPs与步骤(3)中B16细胞膜悬液CCM混合， 挤压， 离心， 得到 1G3‑Cu/Toy NPs@CCM， 即细胞膜仿生的负载含磷树状大分子铜络合物/丰加霉素 的响应型 纳米平台。 3.根据权利要 求2所述的制备方法， 其特征在于， 所述步骤(1)中1G3‑Cu与PEG‑SS‑PCL的 摩尔比为1:3～1: 8； 溶剂与超纯 水的体积比为1: 8～1:12； 溶剂为 二甲基亚砜DMSO。 4.根据权利要求2所述的制备方法， 其特征在于， 所述步骤(1)中搅拌反应温度为室温， 搅拌反应时间为20～3 0h。 5.根据权利要求2所述的制备方法， 其特征在于， 所述步骤(2)中丰加霉素Toy与1G3‑Cu  NPs的质量比为1:1～1:5； 搅拌 反应温度为室温， 搅拌 反应时间为20～3 0h。 6.根据权利要求2所述的制备方法， 其特征在于， 所述步骤(3)中细胞裂解混合液为苯 甲基磺酰氯PMSF与低渗细胞裂解液的混合溶液； 黑色素瘤B16细胞沉淀与细胞裂解混合液 的比例为1 ×107个： 2～4mL。 7.根据权利要求2所述的制备方法， 其特征在于， 所述步骤(3)中冰浴时间为10～ 20min； 反复冻融的工艺 参数为：‑20℃冷冻， 37℃融化， 反复3次。 8.根据权利要求2所述的制备方法， 其特征在于， 所述步骤(4)中1G3‑Cu/Toy NPs与B16 细胞膜悬 液的比例为190～ 210 μg： 0.4～0.6mL。 9.根据权利要求2所述的制备方法， 其特征在于， 所述步骤(4)中挤压是采用滤膜孔径 为400nm的Avanti 微型挤出器反复挤压10～15次。 10.一种如权利要求1所述的细胞膜仿生的负载含磷树状大分子铜 络合物/丰加霉素的 响应型纳米平台在制备MR成像、 化疗和免疫 治疗联合治疗的肿瘤诊疗剂中的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 113855646 B 2细胞膜仿生的负载含磷树状大分子铜络合物/丰加霉素的响 应型纳米平台及其制备和应用 技术领域 [0001]本发明属于响应型载药纳米平台及其制备和应用领域， 特别涉及一种细胞膜仿生 的负载含 磷树状大分子铜络合物/ 丰加霉素的响应型纳米平台及其制备 方法和应用。 背景技术 [0002]恶性肿瘤因其生长速度快， 转移能力强， 复发率高等特点已成为当前威胁人类生 命健康的主要 杀手。 对于中晚期及易转移复发的癌症， 化疗是最主要、 最有效的临床治疗方 式。 但化疗的治疗效果常受限于药物的水溶性差， 生物利用度低， 药物代谢快及毒副作用大 等问题。 为了提高化疗药物的治疗效率， 可以构建肿瘤微环境响应型纳米平台用于负载化 疗药物， 将药物靶向递送至肿瘤部位， 并响应性释放药物， 从而降低对正常组织的毒副作 用， 提高化疗疗效。 由含有敏感键的两亲性聚合物形成的纳米胶束因具备独特的核壳结构， 理想的药物负载能力， 增强的EPR效应及肿瘤微环境刺激 响应性， 可以整合疏水性药物与亲 水性药物， 并实现药物的可控释放， 而被广泛用于构建肿瘤诊疗一体化纳米平台(Li  et  al.Biomaterials,2020,232,1 19749)。 [0003]含磷树状大分子具有和蛋白一样精准的分子结构及较好的临床转化潜力， 已被研 究用作基因载体、 抗病毒剂及金属离子载体。 第三代含磷树状大分子具备独特 的骨架结构 和表面化学特性， 可通过配体修饰将铜离子螯合在 含磷树状大分子末端制得第三代含磷树 状大分子铜络合物(1G3‑Cu)。 本课题组之前的文献报道(Fan  et al.Nano Today,2020,33, 100899)， 1G3‑Cu具有良好的稳定 性及较好的T1弛豫性能， 可有效抑制胰腺癌细胞增殖， 诱导 细胞凋亡， 并可用于体内抗肿瘤及MR成像。 但是， 由于1G3‑Cu存在水溶性较差、 肿瘤靶 向性 不足等缺陷， 限制了其在肿瘤诊疗中的应用。 [0004]丰加霉素(Toyocamycin,Toy)是一种能够作用于内质网， 抑制内质网应激(ERS)的 适应性调节的化疗药物。 在癌细胞中， 由于转录和代谢异常以及细胞增殖过快等会导致细 胞内发生持续的ERS(Chen  et al.Nat.Rev.Cancer,202 0,21(2),7 1‑88)。 癌细胞内ERS发生 时， 伴侣蛋白GRP78从ERS感受器之一的IRE1α脱落， 使IRE1α二聚化并自磷酸化， 从而激活 IRE1α 的RNase结构域， 使其对下游的XBP1  mRNA进行剪接， 产生XBP1 ‑splicing(XBP1s) mRNA。 而XBP1s  mRNA编码活化的蛋白质XBP1s可在一定程度上恢复并维持内质网稳态， 使癌 细胞适应持续的ERS并存活(Yo shida et al.Cell,2001,107(7),881 ‑891)。 Toy则可作用于 IRE1α‑XBP1信号通路， 抑制IRE1α 的核糖核 酸内切酶对XBP1  mRNA的剪接， 从而抑制ERS的适 应性调节， 最终诱导细胞凋亡(Ri  et al.Blood  Cancer J.,2012,2,e79)。 但是Toy对肿瘤 细胞不具有选择性， 用于体内治疗时毒副作用较大。 [0005]为了最大程度的发挥1G3‑Cu与Toy的药效， 可利用含有敏感键的两亲性聚合物， 将 1G3‑Cu与Toy整合， 构建肿瘤微环境响应型纳米平台， 同时改善1G3‑Cu的水溶性及Toy的选择 性， 实现增强的肿瘤诊疗一体化。 为了增强纳米平台的主动靶向性， 还可对纳米平台进行进 一步的修饰。 近年来， 癌细胞膜仿生伪装的纳米平台， 由于具备优异的生物相容性、 延长的说　明　书 1/14 页 3 CN 113855646 B 3