(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202110883803.6 (22)申请日 2021.08.0 3 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 113577292 A (43)申请公布日 2021.11.02 (73)专利权人 深圳市第二人民医院 （深圳市转 化医学研究院） 地址 518000 广东省深圳市福田区华 富街 道笋岗西路3 002号 (72)发明人 王晓君　丁辉　聂国辉　 (74)专利代理 机构 长沙智德知识产权代理事务 所(普通合伙) 43207 专利代理师 陈铭浩 (51)Int.Cl. A61K 45/06(2006.01)A61K 31/14(2006.01) A61K 41/00(2020.01) A61K 47/46(2006.01) A61P 35/00(2006.01) C12N 5/079(2010.01) 审查员 聂俊杰 (54)发明名称 细胞外泌体装载激发试剂和光敏剂的肿瘤 联合治疗制剂及其应用 (57)摘要 本申请涉及医药生物 技术领域， 尤其涉及一 种细胞外泌体装载激发试剂和光敏剂的肿瘤联 合治疗制剂及其应用。 所述的肿瘤联合治疗制剂 为胶质细胞外泌体差异化空间装 载激发试剂、 光 敏剂和生物还原药的运载体， 所述激发试剂能激 发光敏剂进行反应发光， 用于替换激光； 所述生 物还原药负载于胶质细胞外泌体， 用于穿透深层 次组织进行免疫微环境调控。 本申请的的肿瘤联 合治疗制剂 对正常组织无毒副作用， 能透过血脑 屏障 （BBB） ， 耐药性小， 不会导 致肿瘤细胞转移。 权利要求书1页 说明书4页 附图1页 CN 113577292 B 2022.10.18 CN 113577292 B 1.一种细胞外泌体装载激发试剂和光敏剂的肿瘤联合治疗制剂， 其特征在于， 所述肿 瘤联合治疗制剂为胶质细胞外泌体差异 化空间装载激发试剂、 光敏剂和生物还原药的运载 体， 所述激发试剂能激发光敏剂进 行反应发光， 用于替换激光； 所述生物还原药负载于胶质 细胞外泌体， 能穿透深层次组织； 所述激发试剂包括： 鲁米 诺、 光泽精、 双草 酸酯(CPPO)中至少一种； 所述光敏剂包括： 5 ‑氨基酮戊酸、 苯并卟啉衍生物单酸环A、 二氢卟吩(Ce6)中至少一 种； 所述生物还原药包括AQ 4N； 所述肿瘤联合治疗制剂调控促炎因子的表达量， 进行免疫微环境调控； 所述促炎因子包括 IL‑12、 IL‑6、 TNF‑α 和IFN‑γ中至少一种。 2.一种如权利要求1所述的细胞外泌体装载激发试剂和光敏剂的肿瘤联合治疗制 剂的 制备方法， 其特 征在于， 所述方法包括以下步骤： 选取胶质细胞， 将所述胶质细胞与脂多糖溶 液接触并培 养， 得到M1型小胶质细胞； 将所述M1型小胶质细胞与生物还原药进行共培养， 破碎细胞， 纯化后， 得到包裹生物还 原药的M1型外泌体， 即含生物还原药的外泌体； 将化学激发试剂、 光敏剂与含生物还原药的外泌体的共孵育， 以实现差异化的空间装 载， 得到胶质细胞外泌体装载激发试剂和光敏剂的肿瘤联合治疗制剂(C CExosA)。 3.根据权利要求2所述的方法， 其特 征在于， 所述脂多糖溶 液的浓度为1 ‑4 μg/mL。 4.根据权利要求2所述的方法， 其特征在于， 所述破碎细胞包括： 用无外泌体的血清进 行细胞培 养。 5.根据权利要求2所述的方法， 其特征在于， 所述纯化的方式包括离心和去杂质取上清 液中至少一种。 6.一种如权利要求1所述的细胞外泌体装载激发试剂和光敏剂的肿瘤联合治疗制 剂或 如权利要求2 ‑5任意一项所述的方法制得的肿瘤联合治疗制剂在制备抗肿瘤药物中的应 用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 113577292 B 2细胞外泌体 装载激发试剂 和光敏剂的肿瘤联合治疗制剂及其 应用 技术领域 [0001]本申请涉及医药生物技术领域， 尤其涉及 一种细胞外泌体装载激发试剂和光敏剂 的肿瘤联合治疗制剂及其应用。 背景技术 [0002]由于胶质瘤的复杂性、 多样 性及非均相性， 利用外泌体 （exosome） 的免疫微环境调 节功能难以完全治疗胶质瘤。 将多种治疗模式进行联合使用， 不仅可以有效克服单一治疗 模式的弊端， 还可以充分发挥多种治疗 模式之间的协同增强作用。 [0003]微环境调节与化疗协同治疗肿瘤： 由于胶质瘤属于实体性恶性肿瘤， 单纯利用外 泌体的免疫微环境调节功能在胶质瘤治疗过程中没有优势。 化疗是目前胶质瘤治疗的一种 常见方法， 但即便利用胶质瘤的明星化疗药物 “替莫唑胺 ”其中位生存期也仅能提高3个月， 其疗效亟待提升。 在过往的过程中， 很少有将微环境的调控与化疗联动起来的报道， 这为我 们打开了思路。 但传统的化疗手段在肿瘤治疗中仍存在以下问题： ①化疗药物不会选择性 的对肿瘤起效， 对正常组织毒副作用大； ②一些效果较好的化疗药物由于不能透过血脑屏 障 （BBB） ， 难以用于胶质瘤的治疗； ③化疗易产生耐药性； ④有研究发现传统的化疗药物如 DOX、 紫杉醇 （PTX） 等有助于癌细胞分泌含有膜联蛋白 ‑A6的外泌体促进癌症的转移导致治 疗效果不佳。 因此， 激励着科研人员不断去寻找其 他的联合治疗方法。 [0004]另外， 如果能够挖掘 出自由基杀伤和微环境之间的协同性， 将能够显著提高肿瘤 的疗效： 随着技术的不断发展， 逐渐兴起了一些以光动力学治疗 （photo dynamic therapy,   PDT） 为代表的治疗方法， 有研究表明， PDT对胶质瘤有特殊的治疗作用， 因为脑肿 瘤细胞具 有高度摄取光敏剂的能力。 当利用PDT治疗时， 加剧了肿瘤的乏氧水平。 有 科研人员将PDT与 乏氧治疗 结合起来， 增加肿瘤的治疗效果。 但以上体系在胶质瘤治疗中仍然存在以下问题： ①大多数光敏剂具有疏水特性易聚集， 不易到达肿瘤部位； ②胶质瘤在脑室旁出现的概率 最高， 其距离 皮层较远， 利用激光照射很难穿透颅骨到达病灶部位， 若利用植入发光器械或 开颅手术等近距离照射肿瘤区域时又面临着感染的风险， 且病人的接受程度低。 [0005]目前， 脑胶质瘤的生物治疗尚处于摸索阶段， 暂无良好的治疗方法。 以上策略可以 在一定程度上抑制肿瘤生长， 但仍然存在一些问题： ①多种治疗方案的协同仅是简单 的作 用叠加， 达到 “1+1=2”的效果， 没有很好地联动起来； ②没有针对胶质瘤特定的生理特性进 行设计。 [0006]因此， 开发出一种不需要激光照射的动力学治疗方法在脑肿瘤的治疗中具有十分 重要的意 义。 发明内容 [0007]本申请提供了一种细胞外泌体装载激发试剂和光敏剂的肿瘤联合治疗制剂及其 应用， 以解决如何针对肿瘤特定的生理特性进行设计， 得到一种不需要激光照射肿瘤制剂说　明　书 1/4 页 3 CN 113577292 B 3