(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202110874563.3 (22)申请日 2021.07.3 0 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 113584043 A (43)申请公布日 2021.11.02 (73)专利权人 上海信致医药 科技有限公司 地址 201108 上海市闵行区景联路389号5 幢127室 (72)发明人 赵锴　陈晨　杜增民　汤丁越　 凌菲香　吴侠　王慧　蒋威　赵阳　 王利群　郑静　肖啸　郑浩　李尚　 (74)专利代理 机构 上海华诚知识产权代理有限 公司 313 00 专利代理师 徐颖聪(51)Int.Cl. C12N 15/12(2006.01) C12N 15/57(2006.01) C12N 15/864(2006.01) C12N 15/35(2006.01) C07K 14/015(2006.01) A61K 38/39(2006.01) A61K 38/48(2006.01) A61P 27/02(2006.01) A61P 9/10(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 35/02(2006.01) 审查员 彭海航 (54)发明名称 用于治疗视网膜疾病和癌症的转基因表达 盒 (57)摘要 本发明涉及涉及编码内皮抑素的核酸分子、 包含该核酸分子的转基因表达盒以及包含该转 基因表达盒的基因递送系统。 本发 明的转基因表 达盒可用于治疗各种以新生血管为主要病理机 制的视网膜疾病以及多种癌症。 权利要求书1页 说明书14页 序列表25页 附图23页 CN 113584043 B 2022.10.11 CN 113584043 B 1.转基因表达盒， 其包括： CB启动子、 内皮抑素编码序列、 bGH  polyA； 所述内皮抑素编码序列如SEQ  ID NO： 15所示； 所述内皮抑素编码序列带有N末端的ALB信号肽并于编码序列内部插 入内含子； 所述转基因表达盒的核苷酸序列如SEQ  ID NO： 7所示。 2.基因递送系统， 其包括： 权利要求1所述的转基因表达盒和A AV衣壳蛋白。 3.根据权利 要求2所述的基因递送系统， 其中， 所述AAV衣壳蛋白为天然AAV衣壳蛋白或 人工改造的A AV衣壳蛋白。 4.根据权利要求2所述的基因递送系统， 其中， 所述AAV选自： AAV1、 AAV2、 AAV3、 AAV4、 AAV5、 AAV6、 AAV7、 AAV8、 AAV9、 AAV10、 AAV11， AAV12、 AAV ‑DJ、 AAV‑DJ8、 AAV‑DJ9、 AAVrh8、 AAVrh8R和AAVrh10。 5.根据权利要求2所述的基因递送系统， 其中， 所述AAV衣壳蛋白的氨基酸序列如SEQ   ID NO： 2、 SEQ ID NO： 4或SEQ  ID NO： 14所示。 6.权利要求2至5 中任一项所述的基因递送系统在制备用于治疗疾病的药物中的应用， 所述疾病以新 生血管为主要病理机制或诱发因素。 7.药物， 其包含： 权利要求1所述的转基因表达盒或权利要求2至5中任一项所述的基因 递送系统， 以及赋 形剂。 8.根据权利要求7所述的药物， 其中， 所述药物用于治疗以新生血管为主要病理机制或 诱发因素的疾病。 9.根据权利要求8所述的药物， 其中， 所述疾病为视网膜疾病或癌症。 10.根据权利要求9所述的药物， 其中， 所述视网膜疾病包括老年视网膜黄斑病变、 糖尿 病视网膜病变、 由强光引起的视网膜损伤； 所述癌症包括肺癌、 肝癌、 肾癌、 甲状腺癌、 前列 腺癌、 、 乳腺癌、 结肠直肠癌、 子宫颈癌、 白血病 、 淋巴瘤、 黑素瘤和成胶质细胞瘤。 11.根据权利要求7至10中任一项所述的药物， 其中， 所述药物通过全身途径或局部途 径施用。 12.根据权利要求7至10中任一项所述的药物， 其中， 所述药物通过静脉内施用、 肌内施 用、 皮下施用、 经口施用、 局部 接触、 腹膜内施用和病灶内施用。 13.根据权利要求7至10中任一项所述的药物， 其中， 所述药物局部施用于眼睛。 14.根据权利要求13所述的药物， 其中， 所述药物通过玻璃体内注射、 视网膜下注射或 脉络膜上注射局部施用于眼睛。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 113584043 B 2用于治疗视网膜疾病和癌症的转基因表达 盒 技术领域 [0001]本公开涉及编码内皮抑素的核酸分子、 包含该核酸分子的转基因表达盒以及包含 该转基因表达盒的基因递送系统。 背景技术 [0002]病理性新生血管在大量视网膜疾病中出现， 并每年在全世界影响数百万人。 例如， 全球大约有3000万人， 尤其是60岁以上的人患有与年龄有关的黄斑变性(AMD)， 这是导致老 年人失明的主要原因(Klein  R， Peto T等， Am J Ophthalmol(2004)137(3)： 486 ‑95； Friedman  DS， O’Colmain BJ等， Arch  Ophthalmol(2004)122(4)： 564 ‑72； AI‑Zamil WM等， Clin Interv Aging(2017)： 28860 733)。 AMD的特征是在多种因素作用下造成进行性视网膜 损伤。 其中， 有一种严重的AMD被称为湿性AMD， 脉络膜新生血管(CNV)逐渐在整个视网膜 中 扩展， 由于血管壁的脆弱性， 其内部内容物易于渗漏， 这进一步破坏 了视网膜结构的完整性 并阻碍了视觉功能。 糖尿病 性视网膜病(DR)和早产儿视网膜病(ROP)中也普遍存在类似的 新生血管问题， 即新 生血管出血和瘢痕形成分别发生在糖尿病人和新 生儿身上。 [0003]此外， 在肿瘤发生期间会引起过度的新生血管生成， 以促进向癌细胞供应氧气和 营养。 第一， 可以从预先存在的血管网络诱发新血管形成并浸润肿瘤组织； 第二， 肿瘤细胞 可以募集内皮祖细胞形成次级脉管系统； 第三， 肿瘤细胞在预先存在的血管周围聚集并以 管状方式组织内皮细胞来产生新的脉管系统(Jain  RK， Science(2005)307(5706)： 58 ‑62； Carmeliet P等， Nature(201 1)473(7347)： 2 98‑307； Majidpo or J等， Cell Oncol.2021)。 [0004]上述病理情况表明了抗血管生成在治疗视网膜疾病和癌症中的重要性。 血管内皮 生长因子(VEGF)是引发这些疾病中新生血管生长的关键因素。 抗VE GF的方法已引起了广泛 关注。 内皮抑素是由胶原蛋白XVIII的C端产生的20kD片段， 血管抑素是由纤溶酶原的蛋白 水解裂解产生的含有Kringle结构域的蛋白质。 它们都表现出优异的抗血管生成活性并拮 抗VEGF的生物学作用。 在过去的十年中， 这两种血管生成抑制剂已被广泛应用于视网膜病 变和癌症治疗中来抑制新生血管形成(O ’Reilly MS等， Cell(1994)79(2)： 315 ‑28； O’ Reilly MS等， Cell(1997)88(2)： 277 ‑85； 专利号US  9707304 B2和US 2004/0156828  A1)。 因此， 为了实现对视网膜疾病和癌症更好的治疗效果， 还期望获得表达水平更高的内皮抑 素编码序列和血 管抑素编码序列。 [0005]腺相关病毒(AAV， adeno ‑associated  virus)具有低致病 性以及在各种器官组织 中长期稳定表达蛋白的能力， 这些特性使AAV在基因治疗 领域具有明显的优势， 适用于递送 治疗性基因。 然而， 野生型AAV血清型通常广谱地 感染哺乳动物的多个组织/器官， 具有广泛 的组织靶向性， 导致基因传递到脱靶的组织， 从而加剧了不良反应。 AAV颗粒的衣壳蛋白不 仅在复制过程中调节AAV的装配， 而且还促进病毒与质膜上的受体相互作用并进入靶细胞。 研究显示， AAV载体的组织亲嗜性及细胞转化效率主要由其衣壳决定。 鉴于此， 为了实现更 好的治疗效果， 期望对AAV衣壳蛋白进行合适的改造， 获得具有器官(例如眼部)特异性的 AAV载体。说　明　书 1/14 页 3 CN 113584043 B 3