(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202110975348.2 (22)申请日 2021.08.24 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 113476601 A (43)申请公布日 2021.10.08 (73)专利权人 知佰幸细胞库 （浙江） 有限公司 地址 310000 浙江省杭州市滨江区长河街 道滨安路68 8号5幢20层20 03室 (72)发明人 张涛　陈博　 (74)专利代理 机构 合肥市科融知识产权代理事 务所(普通 合伙) 34126 专利代理师 江兰 (51)Int.Cl. A61K 39/395(2006.01) A61P 35/00(2006.01)A61K 8/99(2017.01) A61K 8/64(2006.01) A61K 8/73(2006.01) A61Q 19/02(2006.01) C07K 14/475(2006.01) C07K 16/40(2006.01) C07K 1/14(2006.01) C07K 1/34(2006.01) A61K 38/19(2006.01) A61K 31/715(2006.01) 审查员 谢庆宁 (54)发明名称 干细胞细胞因子联合海藻多糖制备的药物 或化妆品 (57)摘要 本发明涉及干细胞细胞因子联合海藻多糖 制备的药物或化妆品。 本发明提供了表皮干细胞 细胞因子和特异性抑制酪氨酸酶的单克隆抗体 以及海藻多糖能够抑制黑色素瘤细胞的增殖， 具 有较好的美白应用效果前 景。 权利要求书1页 说明书7页 序列表2页 附图2页 CN 113476601 B 2022.05.20 CN 113476601 B 1.细胞因子、 海藻多糖和单克隆抗体在制备抑制黑色素瘤的药物组合物中的用途； 其 中， 细胞因子是采用如下方法制备： 将表皮干细胞置于细胞培养基进 行传代培养， 细胞培养 基为89％DMEM+10％FBS+1％双抗的干细胞培养基， 培养条件为37℃， 5％CO2培养； 取生长良 好的干细胞， 调整细胞浓度为1X106/mL接种于6孔板， 待细胞贴壁后使用添加了50ng ·mL‑ 1 促分泌肽的完全培养基进行换液， 所述促分泌肽的序列如SEQ  ID NO： 1所示， 培养48  h， 其 中培养是在3%O2+5%CO2+92%N2条件下进行； 收集细胞上清液， 将上清液用1KD  超滤膜超滤， 去除分子量1KD以下的小分子杂质， 收集截留液即获得细胞因子； 所述单克隆抗体为特异性抑制酪氨酸酶的单抗， 所述单克隆抗体的轻链可变区和重链 可变区分别如下 所示： 轻链可变区的序列如下 所示： DIVITQRPALMAASPGEKVTITCWYAMSGLTMREQWYQQKSGISPKPWIYDDETMHCGVPARFSGSGSGTSY SLTITSMEAEDAATYYCPHISMFDRDFGAGTKLELK； 重链可变区的序列如下 所示： EVQLEESATELARPGASVKLSCKASGYIFSSVCPKWIKQRPGQGLEWIGWSITECSYEKSLRWQAGKATLTA DKSSSTAYMQLSSLASEDSAVYYCAGKLHHFSGWGLGT TLAVSS。 2.如权利要求1所述的用途， 其特征在于所述药物组合物含有至少一种药学上可接受 的载体。 3.如权利要求1所述的用途， 其特 征在于所述药物组合物还 包含赋形剂。 4.细胞因子、 海藻多糖和单克隆抗体在制备美白化妆品的用途； 所述化妆品含有细胞 因子、 海藻多糖和单克隆抗体， 其中， 细胞因子是采用如下方法制备： 将表皮干细胞置于细 胞培养基进行传代培养， 细胞培养基为89 ％DMEM+10％FBS+1％双抗的干细胞培养基， 培养 条件为37℃， 5 ％CO2培养； 取生长良好的干细胞， 调整细 胞浓度为1X106/mL接种于6孔板， 待 细胞贴壁后使用添加了50ng ·mL‑ 1促分泌肽的完全培养基进 行换液， 所述促分泌肽的序列 如SEQ ID NO： 1所示， 培养48  h， 其中培养 是在3%O2+5%CO2+92%N2条件下进行； 收集细胞上清 液， 将上清液用1KD  超滤膜超滤， 去除分子量1KD以下的小分子杂质， 收集截留液即获得细 胞因子； 所述单克隆抗体为特异性抑制酪氨酸酶的单抗， 所述单克隆抗体的轻链可变区和重链 可变区分别如下 所示： 轻链可变区的序列如下 所示： DIVITQRPALMAASPGEKVTITCWYAMSGLTMREQWYQQKSGISPKPWIYDDETMHCGVPARFSGSGSGTSY SLTITSMEAEDAATYYCPHISMFDRDFGAGTKLELK； 重链可变区的序列如下 所示： EVQLEESATELARPGASVKLSCKASGYIFSSVCPKWIKQRPGQGLEWIGWSITECSYEKSLRWQAGKATLTA DKSSSTAYMQLSSLASEDSAVYYCAGKLHHFSGWGLGT TLAVSS。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 113476601 B 2干细胞细胞因 子联合海藻 多糖制备的药物或化妆品 技术领域 [0001]本发明涉及 生物领域， 具体的涉及干细胞细胞因子联合海藻多糖制备的药物或化 妆品。 背景技术 [0002]细胞因子是指一类由免疫细胞和相关细胞产生、 分泌的高活性多功能小分子蛋 白， 不包括免疫球蛋白、 补体和一般生理性细胞产物， 具有很高的免疫调节活性。 目前已发 现的细胞 因子已有 百余种， 主要包括干扰素、 白细胞介素、 肿瘤坏死 因子、 表皮生长因子、 转 化生长因子、 神经生长因子等。 细胞因子在机体免疫应答、 抗病毒、 抗肿瘤及炎症反应中发 挥着重要作用， 其 不仅在疾病治疗上起着重要作用， 而且是抵抗感染必不可少的物质。 [0003]细胞因子在人体内含量极少， 但生物活性极高， 具有很多重要的生物学效应和生 理功能。 它们与皮肤细胞的生长、 分裂、 分化、 增殖和迁移有关， 可以有效地与皮肤细胞发生 作用， 发挥 突出的美容护肤功效。 现有技术中已经研究了E GF(表皮生长因子)、 aFGF(酸性 成 纤维细胞生长因子)、 bFGF(碱性成纤维细胞生长因子)、 KGF(角质细胞生长因子)、 VEGF(血 管内皮生长因子)等细胞因子在美容 化妆品中的应用。 [0004]EGF在体内能促进机体表皮细胞、 上皮细胞、 成纤维细胞的生长、 分裂和新陈代谢， 促进微血管的生长， 改善细胞生长的微环境。 因此它对受损皮肤、 敏感皮肤、 创伤皮肤以及 改建性皮肤具有良好的修复、 护理作用， 特别是对目前美容院中流行 的换肤术后局部受损 皮肤的修复， 还能预防术后并发症的发生。 E GF还能刺激肉芽组织的形成和促进肉芽组织的 上皮化， 还可调节胶原降解及更新， 使胶原纤维以线性方式排列， 防止结缔组织异常增生， 故而有缩短创伤愈合时间以及减少 疤痕形成的作用， 对防止和护理痤疮也有很好的效果。 aFGF是一种 作用极强的有丝 分裂原， 对来源于中胚层和神经外胚层的多种细胞具有促进分 裂的作用， 可用于创伤、 烧伤、 溃疡等的治疗。 b FGF在美容中的作用可以表现在以下几个方 面： 1).护肤、 修复作用。 bFGF能够改善细胞生长的微环境， 促进弹性纤维和胶原蛋白的合 成， 使肌肤富有弹性， 使皮肤处于滑嫩的状态。 2).抗皱、 防衰老作用。 能够促进成纤维细胞 的生长发育， 不断以新的细胞 取代老化细胞， 因此产生防皱、 祛 皱作用。 [0005]已有研究也分离制备了细胞因子。 比如CN105543313B公开了一种分离纯化人源间 充质干细胞因子的方法， 它包括如下步骤： a、 细胞培养上清液的获取： 取人间充质干细胞， 置于间充质干细胞无血清培养基中培养， 当细胞生长到汇 合度75～85％时， 收集上清液； b、 过滤浓缩： 对步骤a的上清液先采用0.22 μm滤膜过滤； 然后通过50KD超滤膜， 收集透析液， 再 将透析液通过1KD超滤膜， 收集截留液， 得到细胞因子浓缩液。 CN106701672B 公开人源脂肪 间充质干细胞 因子的培养方法， 它包括如下步骤： 取人脂肪间充质干细胞， 置于高辅酶无血 清培养基中， 培 养至细胞汇合度75～85％时， 收集上清液即得。 [0006]但是现有技术分离制备细胞因子的方法还不够多， 制备较好的含有所述细胞因子 的化妆品种类还不够多。说　明　书 1/7 页 3 CN 113476601 B 3