(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202110927611.0 (22)申请日 2021.08.12 (66)本国优先权数据 2020108132 95.X 2020.08.13 CN (71)申请人 南京北恒生物科技有限公司 地址 210061 江苏省南京市江北新区探 秘 路73号树屋十六栋B1-2 (72)发明人 邢芸　任江涛　贺小宏　王延宾　 韩露　 (74)专利代理 机构 苏州创元专利商标事务所有 限公司 3210 3 代理人 范晴 (51)Int.Cl. C12N 5/10(2006.01) C12N 15/12(2006.01)C12N 15/24(2006.01) C12N 15/62(2006.01) C12N 15/867(2006.01) A61K 39/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 31/00(2006.01) A61P 33/00(2006.01) (54)发明名称 工程化免疫细胞及其用途 (57)摘要 本发明涉及一种工程化免疫细胞， 其表达 (i)嵌合受体， 和(ii)外源性 的CCL3、 CCL4和/或 CCL5。 本发明还提供了该工程化免疫细胞在治疗 癌症、 感染或自身免疫性疾病中的用途。 与传统 的工程化免疫细胞细胞相比， 本发 明的工程化免 疫细胞具有显著提高的肿瘤杀伤活性。 权利要求书3页 说明书20页 序列表42页 附图5页 CN 114075550 A 2022.02.22 CN 114075550 A 1.一种工程化免疫细胞， 其表达(i)嵌合受体， 和(ii)外源性的CCL3、 CCL4和/或CCL5基 因。 2.权利要求1所述的工程化免疫细胞， 其中所述CCL3基因与SEQ  ID NO： 77或79所示的 核酸序列具有至少90％同一性， 或者所述CCL3基因编码的多肽与SEQ  ID NO： 78或80所示的 氨基酸序列具有至少90％同一性； CCL4基因与SEQ  ID NO： 81或83所示的核酸序列具有至少 90％同一性， 或者所述CCL4基因编码的多肽与SEQ  ID NO： 82或84所示的氨基酸序列具有至 少90％同一性； CCL5基因与SEQ  ID NO： 85或87所示的核酸序列具有至少 90％同一性， 或者 所述CCL5基因编码的多肽与SEQ  ID NO： 86或8 8所示的氨基酸序列具有至少90％同一 性。 3.权利要求1 ‑2任一项所述的工程化免疫细胞， 其中所述工程化免疫细胞进一步表达 (iii)外源性的白细胞介素。 4.权利要求3所述的工程化免疫细胞， 其中所述白细胞介素是IL ‑2、 IL‑7、 IL‑12、 IL‑ 15、 IL‑21、 IL‑17、 IL‑18、 IL‑23、 IL‑33、 或其亚基、 或其组合、 或其 亚基的组合。 5.权利要求4所述的工程化免疫细胞， 其中所述白细胞介素的编码基因与SEQ  ID NO： 41、 43、 45、 47、 49、 51、 53、 55、 57、 59、 61、 63、 65、 67、 69、 71、 73、 75所示的核酸序列具有至少 90％同一性， 或者所述白细胞介素与 SEQ ID NO： 42、 44、 46、 48、 50、 52、 54、 56、 58、 60、 62、 64、 66、 68、 70、 72、 74、 76所示的氨基酸序列具有至少90％同一 性。 6.权利要求1 ‑5任一项所述的工程化免疫细胞， 其中所述嵌合受体是嵌合抗原受体或T 细胞受体。 7.权利要求6所述的工程化免疫细胞， 其中所述嵌合受体是包含以下的嵌合抗原受体： 配体结合结构域、 跨膜结构域、 共刺激结构域和胞内信号传导结构域。 8.权利要求7所述的工程化免疫细胞， 其中所述配体结合结构域选自免疫球蛋白分子、 Fab、 Fab'、 F(ab')2、 Fv片段、 sc Fv、 二硫键 ‑连接的Fv(sdFv)、 抗体的重链可变区(VH)或轻链 可变区(VL)、 由VH和CH1结构域组成 的Fd片段、 线性抗体、 单结构域抗体、 纳米抗体， 以及非 免疫球蛋白抗原结合支 架。 9.权利要求7或8所述的工程化免疫细胞， 其中所述配体结合结构域与选自 以下的靶标 结合： TSHR、 CD19、 CD123、 CD22、 BAFF ‑R、 CD30、 CD171、 CS ‑1、 CLL‑1、 CD33、 EGF RvIII、 GD2、 GD3、 BCMA、 GPRC5D、 Tn  Ag、 PSMA、 ROR1、 FLT3、 FAP、 TAG72、 CD38、 CD44v6、 CEA、 EPCAM、 B7H3、 KIT、 IL ‑ 13Ra2、 间皮素、 IL ‑l lRa、 PSCA、 PRSS21、 VEGFR2、 LewisY、 CD24、 PDGFR ‑β 、 SSEA‑4、 CD20、 AFP、 Folate受体α、 ERBB2(Her2/neu)、 MUC1、 EGFR、 CS1、 CD138、 NCAM、 Claudin18.2、 Prostase、 PAP、 ELF2M、 Ephrin  B2、 IGF‑I受体、 CAIX、 LMP2、 gploo、 bcr ‑abl、 酪氨酸酶、 EphA2、 Fucosyl   GMl、 sLe、 GM3、 TGS5、 HMWMAA、 o ‑乙酰基‑GD2、 Folate受体β、 TEM1/CD248、 TEM7R、 CLDN6、 GPRC5D、 CXORF61、 CD97、 CD  179a、 ALK、 多聚唾液酸、 PLAC1、 GloboH、 NY ‑BR‑1、 UPK2、 HAVCR1、 ADRB3、 PANX3、 GPR20、 LY6K、 OR51E2、 TARP、 WT1、 NY ‑ESO‑1、 LAGE‑la、 MAGE‑A1、 豆荚蛋白、 HPV   E6、 E7、 MAGE Al、 ETV6‑AML、 精子蛋白17、 XAGE1、 Tie  2、 MAD‑CT‑1、 MAD‑CT‑2、 Fos相关抗原1、 p53、 p53突变体、 前列腺特异性蛋白、 存活蛋白和端粒酶、 PCTA ‑l/Galectin  8、 MelanA/ MARTl、 Ras突变体、 hTERT、 肉瘤易位断点、 ML ‑IAP、 ERG(TMPRSS2  ETS融合基因)、 NA17、 PAX3、 雄激素受体、 Cyclin  Bl、 MYCN、 RhoC、 TRP ‑2、 CYP1B 1、 BORIS、 SART3、 PAX5、 OY ‑TES 1、 LCK、 AKAP‑4、 SSX2、 RAGE ‑1、 人端粒酶逆转录酶、 RU1、 RU2、 肠道羧酸酯酶、 mut  hsp70‑2、 CD79a、 CD79b、 CD72、 LAIR1、 FCAR、 LILRA2、 CD300LF、 CLEC12A、 BST2、 EMR2、 LY75、 GPC3、 FCRL5、 IGLL1、权　利　要　求　书 1/3 页 2 CN 114075550 A 2PD1、 PDL1、 PDL2、 TGFβ 、 APRI L、 NKG2D和它 们的任意组合。 10.权利要求7 ‑9所述的工程化免疫细胞， 其中所述跨膜结构域选自 以下蛋白质的跨膜 结构域： TCRα链、 TCRβ链、 TCRγ链、 TCRδ链、 CD3ζ亚基、 CD3ε亚基、 CD3γ亚基、 CD3δ亚基、 CD45、 CD4、 CD5、 CD8α、 CD9、 CD16、 CD22、 CD33、 CD28、 CD37、 CD64、 CD80、 CD86、 CD134、 CD137和 CD154。 11.权利要求7 ‑10任一项所述的工程化免疫细胞， 其中所述胞内信号传导结构域选自 以下蛋白的信号传导结构域： FcRγ、 FcRβ、 CD3γ、 CD3δ、 CD3ε、 CD3ζ、 CD22、 CD79a、 CD79b和 CD66d。 12.权利要求7 ‑11任一项所述的工程化免疫细胞， 其中所述共刺激结构域是一个或多 个选自以下蛋白质的共刺激信号传导结构域： TLR1、 TLR2、 TLR3、 TLR4、 TLR5、 TLR6、 TLR7、 TLR8、 TLR9、 TLR10、 CARD11、 CD2、 CD7、 CD8、 CD18( LFA‑1)、 CD27、 CD28、 CD30、 CD40、 CD54 (ICAM)、 CD83、 CD134(OX40)、 CD137(4 ‑1BB)、 CD270(HVEM)、 CD272(BTLA)、 CD276(B7 ‑H3)、 CD278(ICOS)、 CD357(GITR)、 DAP10、 DAP12、 LAT、 NKG2C、 SLP76、 PD ‑1、 LIGHT、 TRIM、 CD94、 LTB、 ZAP70以及它 们的组合。 13.权利要求1 ‑12任一项所述的工程化免疫细胞， 其中所述免疫细胞还包含至少一种 失活基因， 其选自以下： CD52、 GR、 TCRα、 TCRβ、 CD3γ、 CD3δ、 CD3ε、 CD247ζ、 HLA ‑I、 HLA‑II、 B2M、 PD1、 CTLA‑4、 LAG3和TIM 3。 14.权利要求1 ‑13任一项所述的工程化免疫细胞， 其中所述CCL3、 CCL4和/或CCL5基因 的表达是 条件型表达 。