(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202110797558.7 (22)申请日 2021.07.14 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 113527435 A (43)申请公布日 2021.10.2 2 (73)专利权人 呈诺再生医学 科技 （珠海横琴新 区） 有限公司 地址 519000 广东省珠海市横琴新区豆蔻 路1号粤澳合作中医药科技产业园科 研总部大楼3 01室-066 (72)发明人 尹乐　顾雨春　 (74)专利代理 机构 北京预立 生科知识产权代理 有限公司 1 1736 专利代理师 李红伟　孟祥斌(51)Int.Cl. C07K 7/08(2006.01) C07K 19/00(2006.01) G01N 33/68(2006.01) G01N 33/574(2006.01) A61K 38/10(2006.01) A61K 38/16(2006.01) A61P 35/00(2006.01) 审查员 贺菁 (54)发明名称 对前列腺癌细胞特异性识别的新型多肽及 其衍生物与应用 (57)摘要 本发明公开了对前列腺癌细胞特异性识别 的新型多肽及其衍生物与应用， 所述多肽经噬菌 体‑多肽文库筛选得到， 能够特异性地结合肿瘤 细胞， 且结合效率高， 可替代传统的单链抗体作 为胞外识别区用于制备肿瘤抗原结合肽 ‑工程化 免疫细胞中， 所述制备方法能够针对抗原不明确 的肿瘤， 显著缩短筛选胞外识别区的时间， 且筛 选出的多肽配体与肿瘤细胞的结合效率更高， 具 有很好的应用前 景。 权利要求书4页 说明书11页 序列表5页 附图3页 CN 113527435 B 2022.06.07 CN 113527435 B 1.一种特异性识别肿瘤细胞的新型多肽， 其特征在于， 所述多肽的氨基酸序列如SEQ   ID NO:1所示； 所述肿瘤 细胞为前列腺癌细胞。 2.一种肿瘤抗原结合肽， 其特征在于， 所述肿瘤抗原结合肽包括含有抗原识别区的胞 外信号结构域、 连接至所述胞外信号结构域的跨膜结构域、 连接至所述跨膜结构域的胞内 信号结构域； 所述抗原识别区由一个或多个权利要求1所述的多肽通过l inker串联得到。 3.根据权利要求2所述的肿瘤抗原结合肽， 其特征在于， 所述多肽的氨基酸序列如SEQ   ID NO:1所示； 所述linker的氨基酸序列如SEQ  ID NO:4所示。 4.根据权利要求2所述的肿瘤抗原结合肽， 其特征在于， 所述抗原识别区由三个权利要 求1所述的多肽通过l inker串联得到。 5.根据权利要求2所述的肿瘤抗原结合肽， 其特征在于， 所述抗原识别区的氨基酸序列 如SEQ ID NO:5所示。 6.根据权利要求2所述的肿瘤抗原结合肽， 其特征在于， 所述抗原识别区的核苷酸序列 如SEQ ID NO:6所示。 7.根据权利要求2所述的肿瘤抗原结合肽， 其特征在于， 所述胞外信号结构域还包括铰 链区。 8.根据权利要求7所述的肿瘤抗原结合肽， 其特征在于， 所述铰链区包括下列分子的铰 链区： CD3ε、 CD4、 CD5、 CD8、 CD8α、 PD1、 CD16、 CD22、 CD28、 CD33、 CD37、 CD45、 CD134、 CD137、 CD152、 CD154。 9.根据权利要求8所述的肿瘤抗原结合肽， 其特 征在于， 所述铰链区为CD 8α 铰链区。 10.根据权利要求9所述的肿瘤抗原结合肽， 其特征在于， 所述CD8α铰链区的氨基酸序 列如SEQ ID NO:7所示。 11.根据权利要求2所述的肿瘤抗原结合肽， 其特征在于， 所述胞外信号结构域还包括 信号肽。 12.根据权利要求11所述的肿瘤抗原结合肽， 其特征在于， 所述信号肽包括下列分子的 信号肽： T细胞受体的α链及β链、 CD3ζ、 CD28、 CD3ε、 CD45、 CD4、 CD5、 CD8、 CD8α、 CD9、 CD16、 CD22、 CD33、 CD3 7、 CD64、 CD80、 CD86、 CD134、 CD13 7、 ICOS、 CD154、 GITR、 免疫球蛋白重链、 免疫 球蛋白轻链。 13.根据权利要求12所述的肿瘤抗原结合肽， 其特 征在于， 所述信号肽为CD 8α 信号肽。 14.根据权利要求13所述的肿瘤抗原结合肽， 其特征在于， 所述CD8α信号肽的氨基酸序 列如SEQ ID NO:8所示。 15.根据权利要求2所述的肿瘤抗原结合肽， 其特征在于， 所述跨膜结构域包括下列分 子的跨膜结构域： T细胞受体的α、 β 或ζ链、 GITR、 ICOS、 D45、 CD3ε、 CD3ζ、 CD4、 CD5、 CD8、 CD8α、 CD9、 CD16、 CD2 2、 CD33、 CD37、 CD64、 CD 80、 CD86、 CD123、 CD134、 CD137、 CD154、 P D1、 2B4。 16.根据权利要求15所述的肿瘤抗原结合肽， 其特征在于， 所述跨膜结构域为2B4跨膜 结构域。 17.根据权利要求16所述的肿瘤抗原结合肽， 其特征在于， 所述2B4跨膜结构域的氨基权　利　要　求　书 1/4 页 2 CN 113527435 B 2酸序列如SEQ  ID NO:9所示。 18.根据权利要求2所述的肿瘤抗原结合肽， 其特征在于， 所述胞内信号结构域包括信 号转导结构域。 19.根据权利要求18所述的肿瘤抗原结合肽， 其特征在于， 所述信号转导结构域包括下 列分子的信号转导结构域： CD3ζ、 FcRγ、 FcRβ、 CDS、 CD3ε、 CD3γ、 CD3δ、 CD5、 CD22、 CD66d、 CD79a、 CD79b、 NKG2D。 20.根据权利要求19所述的肿瘤抗原结合肽， 其特征在于， 所述信号转导结构域为 NKG2D信号 转导结构域。 21.根据权利要求20所述的肿瘤抗原结合肽， 其特征在于， 所述NKG2D的功能性信号转 导结构域的氨基酸序列如SEQ  ID NO:10所示。 22.根据权利要求2所述的肿瘤抗原结合肽， 其特征在于， 所述胞内信号结构域还包括 共刺激信号结构域。 23.根据权利要求22所述的肿瘤抗原结合肽， 其特征在于， 所述共刺激信号结构域包括 下列分子的共刺激信号结构域： 4 ‑1BB(CD137)、 HVEM、 OX40、 CD2、 CD27、 CD28、 CDS、 ICAM ‑1、 CD11a/CD18、 ICOS(CD278)、 CARD1 1、 2B4。 24.根据权利要求23所述的肿瘤抗原结合肽， 其特征在于， 所述共刺激信号结构域为 2B4共刺激信号结构域。 25.根据权利要求24所述的肿瘤抗原结合肽， 其特征在于， 所述2B4共刺激信号结构域 的氨基酸序列如SEQ  ID NO:11所示。 26.根据权利要求2所述的肿瘤抗原结合肽， 其特征在于， 所述肿瘤抗原结合肽由CD8α 信号肽、 抗原识别区、 CD8α 铰链区、 2B4跨膜结构域、 2B4共刺激信号结构域、 NKG2D信号转导 结构域依次连接而成。 27.根据权利要求2所述的肿瘤抗原结合肽， 其特征在于， 所述肿瘤抗原结合肽的氨基 酸序列如SEQ  ID NO:2所示。 28.一种缀 合物， 其特 征在于， 所述 缀合物包括权利要求1所述的多肽。 29.根据权利要求28所述的缀合物， 其特征在于， 所述缀合物还包括连接所述多肽的修 饰部分。 30.根据权利要求29所述的缀合物， 其特征在于， 所述修饰部分包括可检测的标记或治 疗剂。 31.根据权利要求3 0所述的缀 合物， 其特 征在于， 所述可检测的标记包括发光物质。 32.根据权利要求31所述的缀合物， 其特征在于， 所述发光物质包括酶、 成像剂、 造影 剂、 荧光染料或生物素。 33.根据权利要求30所述的缀合物， 其特征在于， 所述治疗剂包括具有抗肿瘤活性的药 物或细胞毒剂。 34.一种分离的核酸分子， 其特征在于， 所述核酸分子包括编码权利要求1所述多肽的 核苷酸序列、 编码权利要求2所述肿瘤抗原结合肽的核苷酸序列。 35.根据权利要求34所述的核酸分子， 其特征在于， 所述编码权利要求1所述多肽的核 苷酸序列如SEQ  ID NO:3所示。 36.根据权利要求34所述的核酸分子， 其特征在于， 所述编码权利要求2所述肿瘤抗原权　利　要　求　书 2/4 页 3 CN 113527435 B 3