(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202110794916.9 (22)申请日 2021.07.14 (30)优先权数据 63/059,366 2020.07.31 US (71)申请人 山东博安生物技术股份有限公司 地址 264670 山 东省烟台市高新区科技大 道39号 (72)发明人 周立　阿瓦尼许.瓦许尼 　 哈沙尔.帕特尔 　依瑞娜.施耐德 　 (51)Int.Cl. C07K 16/46(2006.01) C12N 15/13(2006.01) A61K 39/395(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 35/02(2006.01) (54)发明名称 多价多特异性 抗体 (57)摘要 本发明涉及多价多特异 性抗体， 所述多价多 特异性抗体包括两条重链、 两 条轻链以及第五和 第六抗原结合片段， (1)每个所述重链包括第一 和第二抗原结合片段和重链恒定区， 所述第一和 第二抗原结合片段每个直接或间接连接到所述 重链CH1结构域的N端； 以及(2)每个所述轻链包 括第三和第四抗原结合片段和轻链恒定区， 所述 第三和第四抗原结合片段每个直接或间接连接 到所述轻链恒定区的N端； 以及(3)所述第五和第 六抗原结合片段每个直接或间接地连接到所述 轻链恒定区的C端。 本发明提供的多价多特异性 抗体具有显著提高的肿瘤细胞表面抗原的亲和 力， 并具有显著提高的肿瘤细胞杀伤力。 权利要求书3页 说明书13页 序列表9页 附图6页 CN 114057882 A 2022.02.18 CN 114057882 A 1.一种多价多特异性 抗体， 包括两条重链、 两条 轻链以及第五和第六抗原结合片段， (1)每个所述重链包括第一和第二抗原结合片段和重链恒定区， 所述第一和第二抗原 结合片段每 个直接或间接连接 到所述重链CH1结构域的N端； 以及 (2)每个所述轻链包括第三和第 四抗原结合片段和轻链恒定区， 所述第三和第 四抗原 结合片段每 个直接或间接连接 到所述轻链恒定区的N端； 以及 (3)所述第五和第六抗原结合片段每 个直接或间接地连接 到所述轻链恒定区的C端； 优选地， 所述重链上的第 一和第二抗原结合片段以及轻链上的第 三和第四抗原结合片 段与抗原的相同表位结合； 或者， 所述重链上 的第一和第二抗原结合片段与所述抗原的一 个表位结合， 并且轻链上的第三和第四抗原结合片段与所述 抗原的另一个表位结合； 优选地， 所述重链上的第一抗原结合片段与所述抗原 的第一表位结合， 所述重链上的 第二抗原结合片段与所述抗原的第二表位结合， 所述轻链上的第三抗原结合片段与所述抗 原的第三表位结合， 并且所述轻链上 的第四抗原结合片段与所述抗原的第四表位结合； 或 者， 所述第一抗原结合片段与第一抗原结合， 所述第二抗原结合片段与第二抗原结合， 所述 第三抗原结合片段与第三 抗原结合， 所述第四抗原结合片段与第四抗原结合； 优选地， 所述重链上的第一和第二抗原结合片段与第一抗原结合， 并且所述轻链上的 第三和第四抗原结合片段与第二 抗原结合； 优选地， 所述第一、 第二、 第三、 第四、 第五和第六抗原结合片段选自scFv片段、 Fv片段、 F(ab’)2片段、 Fab'片段、 VHH、 VNAR或SD(单域)； 更优选的， 所述第一、 第二、 第三和第四抗原 结合片段 是VHH； 更优选的， 所述第五和第六抗原结合片段 是scFv。 2.根据权利要求1所述的多价多特异性抗体， 其特征在于， 该抗原选自血液瘤和实体瘤 的肿瘤靶抗原； 优选的， 所述抗原选自CEA、 Claudin  18.2、 GPC3、 受体酪氨酸激酶样孤儿受 体1(ROR1)、 CD38、 H er2、 CD19、 CD20、 CD22、 BCMA、 CAIX、 CD446、 CD133、 EGFR、 EGFRv III、 EpCam、 GD2、 EphA2、 Her1、 Her2、 ICAM ‑1、 IL13Ra2、 Mesothelin、 MUC1、 MUC16、 NKG2D、 PSCA、 NY ‑ESO‑1、 MART‑1、 WT1、 MA GE‑A10、 MAGE ‑A3、 MAGE‑A4、 EBV、 NKG2D、 PD1、 PD ‑L1、 CD25、 IL ‑2和CD3中 的一 种或多种。 3.根据权利要求1或2所述的多价多特异性抗体， 其特征在于， 所述轻链上的第五和第 六抗原结合片段与CD 3结合， 和/或所述重链上的所述第一、 第二、 第三和第四抗原结合片段 为以下1)到4)中任一个： 1)所述重链上的第一和第二抗原结合片段以及所述轻链上的第三和第 四抗原结合片 段与ROR1结合； 优选的， 所述重链上的第一和第二抗原结合片段与ROR1的一个表位结合， 并 且所述轻链上的第三和第四抗原结合片段与ROR1的另一个表 位结合； 更优选的， 所述第一、 第二、 第三和第四抗原结合片段是与人ROR1特异性结合的相同的VHH， 所述VHH具有SEQ  ID  NO:18‑20所示的CDR1 ‑CDR3； 更优选的， 所述VHH包括与SEQ  ID NO:3的序列具有至少95％、 96％、 97％、 98％、 9 9％或100％序列同一 性的氨基酸序列； 2)所述重链上的第一和第二抗原结合片段与ROR1结合， 所述轻链上的第三和第四抗原 结合片段与Claudin  18.2结合； 更优选的， 所述第三和第 四抗原结合片段是与人Claudin   18.2特异性结合的相同的SD(单结构域)， 并且其中SD包括SEQ  ID NO:21‑23所示的CDR1 ‑ CDR3； 优选 的， 所述SD包括与SEQ  ID NO:4的序列具有至少95％、 96％、 97％、 98％、 99％或 100％序列同一性的氨基酸序列； 更优选的， 所述第一和第二抗原结合片段与 1)中相同， 并权　利　要　求　书 1/3 页 2 CN 114057882 A 2且所述第三和第四抗原结合片段是与人Claudin  18.2特异性结合的相同的SD(单结构域)， 并且其中SD包括SEQ  ID NO:21‑23所示的CDR1 ‑CDR3； 优选的， 所述SD 包括与SEQ ID NO:4的 序列具有至少95％、 96％、 97％、 98％、 9 9％或100％序列同一 性的氨基酸序列； 3)所述重链上的第一和第二抗原结合片段与Claudin  18.2结合， 并且所述轻链上的第 三和第四抗原结合片段与ROR1结合； 更优选的， 所述第一和第二抗原结合片段是与人 Claudin 18.2特异性结合的相同的SD(单结构域)， 并且其中SD包括SEQ  ID NO:21‑23所示 的CDR1‑CDR3； 优选的， 所述SD包括与SEQ  ID NO:4的序列具有至少95％、 96％、 97％、 98％、 99％或100％序列同一性的氨基酸序列； 更优选的， 所述第一和第二抗原结合片段是与人 Claudin 18.2特异性结合的相同的SD(单结构域)， 并且其中SD包括SEQ  ID NO:21‑23所示 的CDR1‑CDR3； 优选的， 所述SD包括与SEQ  ID NO:4的序列具有至少95％、 96％、 97％、 98％、 99％或100％序列同一 性的氨基酸序列， 并且所述第三和第四抗原结合片段与1)中相同； 4)所述第一、 第二、 第三和第四抗原结合片段与人Claudin  18.2结合； 优选的， 所述第 一、 第二、 第三和第 四抗原结合片段为相同的SD(单结构域)， 并且其中SD包括SEQ  ID NO: 21‑23所示的CDR1 ‑CDR3； 优选 的， 所述SD包括与SEQ  ID NO:4的序列具有至少95％、 96％、 97％、 98％、 9 9％或100％序列同一 性的氨基酸序列。 4.根据权利要求1或3所述的多价多特异性抗体， 其特征在于， 所述第五和第六抗原结 合片段是scFvs， 且各自包括轻链可变区和重链可变区， 所述轻链可变区包括SEQ  ID NO: 15‑17所示的CDR1 ‑CDR3； 优选的， 所述轻链可变区包括与SEQ  ID NO:2的氨基酸序列具有至 少约95％、 96％、 97％、 98％、 99％或100％同一性的氨基酸序列， 和/或所述重链可变区包括 SEQ ID NO:12‑14所示的CDR1 ‑CDR3； 优选的， 所述轻链可变区包括与 SEQ ID NO:1的氨 基酸 序列具有至少约95％、 96％、 97％、 98％、 9 9％或100％同一性的氨基酸序列； 或者 所述轻链可变区包括与SEQ  ID NO:7的氨基酸序列具有至少约95％、 96％、 97％、 98％、 99％或100％同一性的氨基酸序列， 和/或所述重链可变区包括SEQ  ID NO:1的修饰版本， 优选地， 所述SEQ  ID NO:1的修饰版本具有选自N30S、 K31T、 F98W、 K52bN和Y58T的一个 或多个突变； 优选的， 所述修饰版本具有以下1)到3)中任一个： 1)N30S、 K31T和F98W突变； 2) N30S、 K31T、 F98W和K52bN突变； 3)N30S、 K31T、 F98W和Y58 T突变,编号系统为Kabat编号系统； 或者 所述SEQ ID NO:1的修饰版本具有选自Q13K、 K83R和L108T的一个或多个