(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202111026349.9 (22)申请日 2021.09.02 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 113797335 A (43)申请公布日 2021.12.17 (73)专利权人 湖南师范大学 地址 410081 湖南省长 沙市麓山路3 6号湖 南师范大学 (72)发明人 刘中华　张倩倩　许佳薇　彭佳翼　 梁宋平　 (74)专利代理 机构 长沙朕扬知识产权代理事务 所(普通合伙) 43213 专利代理师 郭蓓霏　杨斌 (51)Int.Cl. A61K 41/00(2020.01) A61K 47/64(2017.01) A61P 35/00(2006.01) B82Y 5/00(2011.01) B82Y 40/00(2011.01)C07K 19/00(2006.01) C07K 1/04(2006.01) C07K 1/34(2006.01) C07K 1/107(2006.01) (56)对比文件 GR 1008083 B,2014.01.17 KR 20140 020533 A,2014.02.19 Qianli Zou等.Bi ological Photothermal Nanodots Based o n Self-As sembly of Peptide−Porphyri n Conjugates for Antitumor Therapy. 《Journal of the American C hemical Society》 .2017,第139卷第 1921-1927页. Eisaku Ko ndo等.Tumour lineage-homing cell-penetrati ng peptides as anticancer molecular del ivery system s. 《Nature communications》 .2012,第1-13页. (续) 审查员 于秀培 (54)发明名称 基于多肽的自组装光敏纳米纤维材料及其 制备方法、 在制备抗肿瘤药物中的应用 (57)摘要 本发明公开了一种基于多肽的自组装光敏 纳米纤维材料(C FTNFs)， 其主要由二苯丙氨酸 短 肽FF、 细胞穿透肽CPP44和卟啉光敏剂共价偶联 得到。 该CFTNFs不仅在体外对HepG2细胞表现出 优异的光毒性， 会引起更多的HepG2细胞凋亡和 坏死； 而且具有肿瘤靶向能力、 改善肿瘤滞留情 况和抑制肿瘤增殖， 在体内展现出更好的抗肿瘤 增殖活性， 可 以显著提高光动力治疗效果， 有望 用于光动力抗肿瘤药物的研发。 本发 明还公开了 该CFTNFs的制备方法、 在制备抗肿瘤药物中的应 用。 制备方法的操作 简单， 过程容易控制， 成功构 建了基于二苯丙氨酸短肽、 细胞穿透肽和卟啉光 敏剂共价偶联的CFTNFs纳米纤维材料， 且制备得到的产品纯度高。 [转续页] 权利要求书2页 说明书7页 序列表1页 附图6页 CN 113797335 B 2022.09.20 CN 113797335 B (56)对比文件 Qianqian Zhang等.A targeted self- assembling photosensitizer nan ofiber constructed by multicompo nent coordination. 《Biomaterials Science》 .2021, 第10卷第1 14-123页. Jieling Li等.Self-As sembly of Monomeric Hydrophobic Photosensitizers with Short Peptides Formi ng Photodynamic Nanoparticles w ith Real-Time Track ing Property and w ithout the Ne ed of Release in Vivo. 《ACS Ap plied Materials & Interface》 .2018,第10卷第28420 -28427页. Fengqing Li等.J-aggregation in porphyri n nanoparticles i nduced by diphenylalan ine. 《Journal of So lid State Chemistry》 .2017,第252卷第86 -92页.2/2 页 2[接上页] CN 113797335 B1.一种基于多肽的自组装光敏纳米纤维材料， 其特征在于， 其主要由二苯丙氨酸短肽 FF、 细胞穿透肽CPP44和卟啉光敏剂共价偶联得到， 其中所述细胞穿透肽CPP44的氨基酸序 列如SEQ ID NO： 1所示； 所述自组装光敏纳米纤维材 料的宽度为10 ‑20nm， 长度为2 ‑2.5 μm。 2.根据权利要求1所述的自组装光敏纳米纤维材料， 其特征在于， 所述自组装光敏纳米 纤维材料的分子量 为3466.49Da。 3.一种如权利要求1或2所述的自组装光敏纳米纤维材料的制备方法， 其特征在于， 包 括如下步骤： （1） 向含有 卟啉光敏剂的DMF溶液中， 再加入二乙醇酸酐， 在室温下避光搅拌反应， 然后 依次向溶液 中加入CHCl3、 水， 得到的产物进行萃取， 收集有机相进行洗涤、 浓缩、 干燥， 得到 DA‑卟啉光敏剂； （2） 采用Rink  Amide树脂通过Fmoc固相多肽合成法制备细胞穿透肽CPP44， 并进一步加 入二苯丙氨酸短肽F F合成CPP44‑FF肽基树脂； （3） 将所述DA ‑卟啉光敏剂加入DMF溶液中混合， 然后加入DIPEA、 HOBt和TBTU， 混合反应 后， 再加入所述CPP44 ‑FF肽基树脂， 在室温下摇动 反应， 得到的树脂使用三氟乙酸/苯甲硫 醚/苯甲醚混合液进行裂解反应后， 在冷乙醚中沉淀， 再用水将沉淀溶解后过滤， 得到的上 清液经过进一步分离纯化， 得到 CPP44‑FF‑卟啉光敏剂； （4） 将所述CPP44 ‑FF‑卟啉光敏剂加入DMSO溶液中， 与水混合， 进行低温老化， 然后对其 进行透析、 超滤， 收集保留在超滤管上管中的产物， 即得到所述的自组装光敏纳米纤维材 料。 4.根据权利要求3所述的制备方法， 其特征在于， 所述步骤 （1） 中， 所述卟啉光敏剂与二 乙醇酸酐的摩尔比为1 ‑2:3， 反应时间为20 ‑28h； 所述萃取采用的萃取剂为CHCl3， 洗涤采用 的洗涤剂为水。 5.根据权利要求3所述的制备方法， 其特征在于， 所述步骤 （2） 的具体操作包括如下步 骤： 首先将Rink  Amide树脂放入盖好底盖的合成柱中， 加入DMF进行活化， 抽干后加 入哌啶 溶液于合成柱中， 摇动反应， 抽干后用DMF洗涤， 吸干后得到树脂； 然后将HCTU、 HOBt和氨基 酸溶于N‑甲基吗啉溶液中后转移到合 成柱中与所述树脂 混匀， 摇动反应， 抽滤， DMF洗涤， 抽 干； 按照上述方法， 依次加入组成细胞穿透肽CPP44和二苯丙氨酸短肽FF的氨基酸， 直到最 后一个氨基酸偶联完成， 得到 CPP44‑FF肽基树脂 。 6.根据权利 要求3所述的制备方法， 其特征在于， 所述步骤 （3） 中， 所述DA ‑卟啉光敏剂、 DIPEA、 HOB t和TBTU的摩尔比为0.4 ‑0.6:1:1:1； 所述DA ‑卟啉光敏剂与CPP44 ‑FF肽基树脂的 摩尔比为0.4 ‑0.6:2； 所述三氟乙酸/苯甲硫醚/苯甲醚混合液中， 三氟乙酸、 苯甲硫醚、 苯甲 醚的体积比为95:3:2； 所述混合反应的时间为15 ‑30min， 所述摇动反应的时间为20 ‑28h， 所 述裂解反应的时间为120 ‑180min； 所述过滤采用的滤头尺寸0.22  μm， 所述分离纯化采用的 色谱柱为C18  RP‑HPLC。 7.根据权利要求3所述的制 备方法， 其特征在于， 所述步骤 （4） 中， CPP44 ‑FF‑卟啉光敏 剂加入到DMSO溶液中后， 所含CPP44 ‑FF‑卟啉光敏剂的浓度 为30 mg mL‑1； 所述DMSO溶液与 水的体积比为1 ‑2:9； 所述低温老化的温度为2 ‑6℃， 时间为20 ‑28 h。 8.根据权利要求3 ‑7中任一项所述的制备方法， 其特征在于， 所述步骤 （4） 中， 所述透 析、 超滤具体包括如下步骤： 将低 温老化后得到的溶液密封在截留分子量为5kDa的透析袋权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 113797335 B 3