(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202110850025.0 (22)申请日 2021.07.27 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 113666984 A (43)申请公布日 2021.11.19 (73)专利权人 中国科学院西北高原生物研究所 地址 810008 青海省西宁市城西区西关大 街59号 (72)发明人 卫阳飞　陈涛　王硕　李玉林　 申诚　赵景阳　孔令繁　杨丽　 丁永渊　 (74)专利代理 机构 青海省专利服 务中心 6 3100 专利代理师 周同永 (51)Int.Cl. C07J 63/00(2006.01)A61P 35/00(2006.01) 审查员 张建宏 (54)发明名称 唐古特铁线莲中皂苷类化学对照品的分离 制备工艺及其应用 (57)摘要 本发明涉及化学对照品的制备和应用技术 领域， 具体涉及唐古特铁线莲中皂苷类化学对照 品的分离制备工艺及其应用。 具体制备工艺为提 取、 正丁醇粗富集、 大孔树脂精细富集、 高速逆流 色谱分离及结构鉴定。 本发明方法将大孔树脂和 高速逆流色谱技术相结合， 通过优化富集和分离 条件， 建立了唐古特铁线莲中7种结构类似的齐 墩果烷型皂苷类化学对照品的高效分离制备工 艺， 操作简单、 方便、 易于实现自动化控制， 具有 重复性和稳定性好的优点， 非常适合唐古特铁线 莲中7种皂苷类化学对照品的制备， 对于天然产 物中皂苷类化学对照品的制备具有重要的参考 价值。 本发 明提供的齐 墩果烷型三萜皂苷类化学 对照品可作为抗肿瘤药物的先导性化合物， 有良 好的应用前 景。 权利要求书4页 说明书18页 附图9页 CN 113666984 B 2022.07.08 CN 113666984 B 1.唐古特铁线莲中皂苷类化学对照品的分离制备工艺， 其特征在于， 具体步骤包括如 下： 步骤1， 提取： 将唐古特铁线莲全草干燥粉碎， 以1g： 5～30mL的比例用体积浓度为60～ 95％的乙醇， 在提取温度为60～90℃的条件下进行加热回流提取， 其中， 提取次数1～4次、 每次1～4h， 合并提取 液， 减压浓 缩冷冻干燥， 得到粗 提物； 步骤2， 正丁醇粗富集： 将上述粗提物混悬于纯水中， 首先采用石油醚、 乙酸乙酯分别萃 取至上相无颜色， 然后再用1～5倍体积的正丁醇萃 取1～5次， 收集所有正丁醇萃 取液， 减压 浓缩， 冷冻干燥， 得到粗皂苷提取物； 步骤3， 大孔树脂精细富集： 上样， 将上述粗皂苷提取物用纯水配置成7.5～60mg/mL的 溶液， 以1～5BV/h的流速上大孔树脂柱， 流出液反复上柱1～5次， 静置2～12h； 除杂， 采用0 ～40％乙醇以1～5BV/h的流速洗脱1～8BV； 富集， 在30～90％乙醇中， 选取2～4种乙醇浓 度， 分别以1～5BV/h的流速洗脱1～8BV， 得到2～4组洗脱馏分， 分别减压浓缩至恒重， 得到2 ～4组皂苷的精细富 集粉末； 步骤4， 高速逆流色谱分离： 选取上述皂苷的精细富集粉末2组， 分别 采用高速逆流色谱 分离， 得到7种皂苷类化学对照品； UPLC ‑ELSD分析7个皂苷化学对照品的纯度均大于98％； 步骤5， 结构鉴定： 将所述7种皂苷类化学对照品通过1H‑NMR、13C‑NMR进行结构鉴定， 其 中， 6种已知皂苷分别为： Hederacholichiside  F； Tanguticoside  B； Tauroside  St‑H1； Hederoside  H1； kalopanaxsaponin  G和Hederasaponin  B； 1种新皂苷为3 ‑O‑β‑D‑ allopyranosyl(1 →3)‑α‑L‑rhamnopyranosyl(1 →2)‑α‑L‑arabinop   yranosylhederagenin28 ‑O‑α‑L‑rhamnopyranosyl(1 →4)‑β‑D‑glucopyrano  syl(1→6)‑ β‑D‑glucopyrano syl ester， 对 新皂苷进 一步采用HMBC  and NOESY确认； 经结构鉴定 出的7 种皂苷类化学对照品为结构类似的齐墩果烷型皂苷类化合物； 上述7种皂苷类化学对照品 的化学结构式依次如下： Hederacholichiside F权　利　要　求　书 1/4 页 2 CN 113666984 B 2Tanguticoside  B Tauroside  St‑H1 Hederoside  H1权　利　要　求　书 2/4 页 3 CN 113666984 B 3