(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202110868651.2 (22)申请日 2021.07.3 0 (66)本国优先权数据 20201075 5298.2 2020.07.31 CN (71)申请人 江苏恒瑞医药股份有限公司 地址 222047 江苏省连云港市经济技 术开 发区昆仑山路7号 申请人 上海恒瑞医药有限公司 (72)发明人 顾晓玲　金薪盛　叶鑫　陶维康　 (51)Int.Cl. C07K 16/46(2006.01) C12N 15/13(2006.01) G01N 33/68(2006.01) G01N 33/574(2006.01) A61K 39/395(2006.01)A61P 35/00(2006.01) A61P 35/02(2006.01) (54)发明名称 双特异性 抗原结合分子及其医药用途 (57)摘要 本披露涉及双特异性抗原结合分子及医药 用途。 具体地， 本披露涉及一种分离的双特异性 抗原结合分子， 其包含至少一个能够特异性结合 PD‑1的第一抗原结合域， 和至少一个能够特异性 结合VEGF的第二抗原结合域， 及其作为药物的用 途。 特别地， 本披露涉及一种双特异性抗原结合 分子在制备用于治疗PD ‑1和/或VEGF相关的疾病 或病症的药物中的用途。 权利要求书6页 说明书63页 序列表136页 附图12页 CN 114057883 A 2022.02.18 CN 114057883 A 1.一种双特异性抗原结合分子， 其包含至少一个能够特异性结合PD ‑1的第一抗原结合 域， 和至少一个能够特异性结合VEGF的第二 抗原结合 域； 其中所述能够特异性结合PD ‑1的第一抗原结合域包含重链可变区PD ‑1‑VH和轻链可变 区PD‑1‑VL， 其中： 所述PD‑1‑VH具有： 包含SEQ  ID NO： 65的氨基酸序列的PD ‑1‑HCDR1， 包含SEQ  ID NO： 66 的氨基酸序列的P D‑1‑HCDR2， 和包 含SEQ ID NO： 67的氨基酸序列的P D‑1‑HCDR3； 且 所述PD‑1‑VL具有： 包含SEQ  ID NO： 68的氨基酸序列的PD ‑1‑LCDR1， 包含SEQ  ID NO： 12 的氨基酸序列的P D‑1‑LCDR2， 和包 含SEQ ID NO： 69的氨基酸序列的P D‑1‑LCDR3； 优选地， 所述PD‑1‑VH具有： 包含SEQ  ID NO： 8的氨基酸序列的PD ‑1‑HCDR1， 包含SEQ  ID NO： 9的 氨基酸序列的P D‑1‑HCDR2， 和包 含SEQ ID NO： 10的氨基酸序列的P D‑1‑HCDR3； 且 所述PD‑1‑VL具有： 包含SEQ  ID NO： 49的氨基酸序列的PD ‑1‑LCDR1， 包含SEQ  ID NO： 12 的氨基酸序列的P D‑1‑LCDR2， 包 含SEQ ID NO： 13的氨基酸序列的P D‑1‑LCDR3。 2.根据权利要求1所述的双 特异性抗原结合分子， 其中所述PD ‑1‑VH包含SEQ  ID NO： 27 的氨基酸序列或包含与 SEQ ID NO： 27具有至少95％， 96％， 97％， 98％或99％的序列同一性 的氨基酸序列， 和所述PD ‑1‑VL包含SEQ  ID NO： 55的氨基酸序列或包含与SEQ  ID NO： 55具 有至少95％， 96％， 97％， 98％或9 9％的序列同一 性的氨基酸序列； 优选地， 所述PD ‑1‑VH包含SEQ  ID NO： 27的氨基酸序列， 和所述PD ‑1‑VL包含SEQ  ID  NO： 55的氨基酸序列。 3.根据权利要求1或2所述的双特异性抗原结合分子， 其中所述双特异性抗原结合分子 还包含重链恒定区和轻链恒定区； 优选地， 所述重链恒定区包含SEQ  ID NO： 72的氨基酸序列， 和所述轻链恒定区包含SEQ   ID NO： 73的氨基酸序列。 4.根据权利要求1至3任一项所述的双特异性抗原结合分子， 其中所述 能够特异性结合 VEGF的第二 抗原结合 域包含重链可变区VEGF ‑VH和轻链可变区VEGF ‑VL， 其中： 所述VEGF ‑VH具有： 包含SEQ  ID NO： 87的氨基酸序列的VEGF ‑HCDR1， 包含SEQ  ID NO： 88 的氨基酸序列的VEGF ‑HCDR2， 和SEQ  ID NO： 89的氨基酸序列的VEGF ‑HCDR3； 且 所述VEGF ‑VL具有： 包含SEQ  ID NO： 90的氨基酸序列的VEGF ‑LCDR1， 包含SEQ  ID NO： 91 的氨基酸序列的VEGF ‑LCDR2， 和包 含SEQ ID NO： 92的氨基酸序列的VEGF ‑LCDR3； 优选地， 所述VEGF ‑VH包含与SEQ  ID NO： 85具有至少95％， 96％， 97％， 98％或99％的序 列同一性的氨基酸序列， 和所述VEGF ‑VL包含与SEQ  ID NO： 86具有至少95％， 96％， 97％， 98％或99％的序列同一 性的氨基酸序列； 更优选地， 所述VEGF ‑VH包含SEQ  ID NO： 85的氨基酸序列， 和所述VEGF ‑VL包含SEQ  ID  NO： 86的氨基酸序列。 5.根据权利 要求4所述的双特异性抗原结合分子， 其中所述PD ‑1‑VH直接或通过连接子 连接至VEGF‑VH， 并且P D‑1‑VL直接或通过 连接子连接至VEGF‑VL； 或 所述VEGF ‑VH与所述VEGF ‑VL直接或通过连接子连接形成VEGF ‑scFv抗原结合域； 并且 所述PD‑1‑VH与所述VEGF ‑scFv抗原结合 域分别直接或通过 连接子连接至所述重链恒定区； 优选地，权　利　要　求　书 1/6 页 2 CN 114057883 A 2所述的双特异性抗原结合分子具有式(i)所示结构的第一链和式(ii)所示结构的第二 链， (i)[PD‑1‑VH]‑[连接子]‑[VEGF‑VH]‑[重链恒定区]； (ii)[PD‑1‑VL]‑[连接子]‑[VEGF‑VL]‑[轻链恒定区]； 其中所述式(i)和式(i i)是从N端到 C端排列的； 或 所述的双特异性抗原结合分子具有式(iii)所示结构的第一链和式(iv)所示结构的第 二链， (iii)[PD‑1‑VH]‑[重链恒定区] ‑[连接子]‑[VEGF‑VH]‑[连接子]‑[VEGF‑VL]； (iv)[PD‑1‑VL]‑[轻链恒定区]； 其中所述式(i ii)和式(iv)是从N端到 C端排列的。 6.根据权利要求1至3任一项所述的双特异性抗原结合分子， 其中所述 能够特异性结合 VEGF的第二抗原结合域包含与SEQ  ID NO： 94具有至少9 5％、 96％、 97％、 98％、 99％或100％ 的序列同一性的氨基酸序列； 或所述能够特异性结合VE GF的第二抗原结合域包含与S EQ ID  NO： 141具有至少95％、 96％、 97％、 98％、 9 9％或100％的序列同一 性的氨基酸序列； 优选地， 所述能够 特异性结合VEGF的第二抗原结合域包含SEQ  ID NO： 94的氨基酸序列 或SEQ ID NO： 94的变体， 所述变体包含一个或多个选自由T100C、 I101T、 V116A、 E129C、 V132A、 L155C、 G160Q、 G160T、 G160P、 G162T、 G162D、 G162S、 G164N、 G164A、 G164E、 G166Y、 G166R、 G166A、 K165C、 S188C和T19 3C组成的组的氨基酸取代， 其中所述的变体在同一位点上 仅有一个氨基酸取代； 或所述能够特异性结合VEGF的第二抗原结合域包含SEQ  ID NO： 141 的氨基酸序列或SEQ  ID NO： 141的变体， 所述变体包含一个或多个选自由Y11C和 T90C组成 的组的氨基酸取代； 更优选地， 所述能够特异性结合VEGF的第二抗原结合域具有选自由SEQ  ID NO： 94至 SEQ ID NO： 100、 SEQ ID NO： 141和SEQ  ID NO： 142组成的组的氨基酸序列。 7.根据权利要求1 ‑3、 6任一项所述的双特异性抗原结合分子， 其中所述能够特异性结 合VEGF的第二 抗原结合 域直接或通过 连接子连接至所述重链恒定区； 或 所述能够特异性结合VEGF的第二 抗原结合 域直接或通过 连接子连接至所述PD‑1‑VH； 优选地， 所述的双特异性抗原结合分子具有式(v)所示结构的第一链和式(iv)所示结构的第二 链， (v)[PD‑1‑VH]‑[重链恒定区] ‑[连接子]‑[能够特异性结合VEGF的第二 抗原结合 域]； (iv)[PD‑1‑VL]‑[轻链恒定区]； 其中所述式(v)和式(iv)是从N端到 C端排列的； 或 所述的双特异性抗原结合分子具有式(vi)所示结构的第一链和式(iv)所示结构的第 二链， (vi)[能够特异性结合VEGF的第二 抗原结合 域]‑[连接子]‑[PD‑1‑VH]‑[重链恒定区]； (iv)[PD‑1‑VL]‑[轻链恒定区]； 其中所述式(vi)和式(iv)是从N端到 C端排列的。 8.根据权利要求1或2所述的双特异性抗原结合分子， 其中， 所述PD ‑1‑VH包含SEQ  ID  NO： 27的氨