(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202110814329.1 (22)申请日 2021.07.19 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 113549158 A (43)申请公布日 2021.10.26 (73)专利权人 广州百暨基因科技有限公司 地址 510700 广东省广州市黄埔区经济技 术开发区科 学城开源大道 206号第3层 (72)发明人 李光超　周兆　丁雯　罗敏　 (74)专利代理 机构 华进联合专利商标代理有限 公司 44224 专利代理师 董洪荣 (51)Int.Cl. C07K 19/00(2006.01) C12N 15/62(2006.01)C12N 15/85(2006.01) C12N 5/10(2006.01) A61K 35/17(2015.01) A61P 35/00(2006.01) 审查员 周振威 (54)发明名称 包含突变型IL15以及嵌合抗原受体的融合 蛋白 (57)摘要 本发明涉及生物医学领域， 具体而言， 涉及 一种包含突变型IL15以及嵌合抗原受体的融合 蛋白。 该融合蛋白包括依次串联的嵌合抗原受 体、 2A肽和突变型IL15。 分泌的突变型IL15可使 宿主细胞例如γδT细胞具有更强的扩增能力和 更长的体内外持久性， 因而具有比传统CAR疗法 更好的抗肿瘤效果。 权利要求书1页 说明书8页 序列表4页 附图2页 CN 113549158 B 2022.10.21 CN 113549158 B 1.分离的γδT细胞， 其特征在于， 含有融合蛋白， 所述融合蛋白包括依次串联的嵌合抗 原受体、 2 A肽和突变型I L15； 所述突变型IL15的氨基酸序列如SEQ  ID NO: 1所示； 所述嵌合 抗原受体包 含A） sc‑Fv区、 B） 铰链区、 C） 跨膜域和D） 胞内信号传导区； 所述sc‑Fv区为来自FMC63的抗体区段， 所述sc ‑Fv区的氨基酸序列如SEQ  ID NO: 2所 示； 所述铰链区选自CD 8α 的hinge区， 所述铰链区的氨基酸序列如SEQ  ID NO: 3所示； 所述跨膜域为CD8α 跨膜区， 所述 跨膜域的氨基酸序列为SEQ  ID NO： 4所示； 所述胞内信号传导区包含CD3ζ信号传导域， 所述胞内信号传导区的氨基酸序列如SEQ   ID NO： 5所示； 所述胞内信号传导区包 含DAP10共刺激域， DAP10的氨基酸序列如SEQ  ID NO： 7所示。 2.根据权利要求1所述的γ δT细胞， 其特 征在于， 所述2 A肽为P2A。 3.权利要求1或2所述的γ δT细胞含有的融合蛋白。 4.分离的核酸， 表达得到 权利要求3所述的融合蛋白。 5.含有权利要求 4所述核酸的载体。 6.药用组合物， 其包 含权利要求1或2所述的γ δT细胞。 7.权利要求1或2所述的γ δT细胞在制备用于预防和/或治疗肿瘤的药物中的应用。 8.根据权利要求7 所述的应用， 其特 征在于， 所述sc ‑Fv区特异性识别CD19。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 113549158 B 2包含突变型IL15以及 嵌合抗原受体的融合蛋白 技术领域 [0001]本发明涉及生物医学领域， 具体而言， 涉及一种包含突变型IL15以及嵌合抗原受 体的融合蛋白。 背景技术 [0002]T细胞需要三种信号才能完全活化并维持功能： (i)肽 /MHC复合物 呈递的抗原(ii) 有效的共刺激信号和(iii)可溶性细胞因子形式的生长和分化因子。 第二代和第三代CAR可 提供前两个信号， 但没有主动供第三个依赖细胞因子的信号。 为了将第三个信号也主动传 递至表达CAR的T淋巴细胞， 有研究将白介素(IL) ‑2受体β 链的胞质结构域和STAT3结合 酪氨 酸‑XX‑谷氨酰胺(YXXQ)基序与CD3 ‑ζ和CD28信号结构域相连。 值得注意的是， 第三种信号传 导模块的加入使基因修饰的T细胞在体内具有更长的持久性， 从而提供了更加有效的抗肿 瘤作用。 [0003]细胞因子是一些比较小的蛋白质， 其对免疫细胞的分化和功能具有重要的作用。 因此， 许多细胞因子(例如IL ‑2， IL‑12， IL‑18和IL‑21)已在临床试验使用， 主要用于癌症的 治疗。 但是， 系统性施用会导 致严重的副作用， 例如系统性施用I L‑12治疗多发性骨髓瘤。 [0004]为了克服上述问题同时充 分利用细胞因子积极的作用， 有研究采用表达CD19 ‑CAR 和IL12的载体转导T细胞， 构建了能表达IL12的CAR ‑T细胞。 这些CAR ‑T细胞有倾向性地归巢 至肿瘤部位， 在这里其分泌的IL12有助于有效的清除肿 瘤。 肿瘤免疫微环境中的Treg细胞 会损伤T细胞的抗肿瘤反应， 但研究表明CD19 ‑IL12 CAR‑T细胞能够抵抗Treg细胞的抑制作 用。 另外， 伴随着巨噬细胞的激活， 肿瘤部位T细胞的持久性也会相应地延长。 然而， 即使在 这些情况下， IL12的分泌水平也需要严格的调控， 因为大剂量的注 射持续表达IL12的CAR ‑T 后观察到相应的副作用。 [0005]除上述问题外， 现有技 术中也缺乏针对其 他细胞因子与CAR技 术联用的研究。 发明内容 [0006]本发明的第一方面涉及融合蛋白， 包括依次串联的嵌合抗原受体、 2A肽和突变型 IL15； [0007]所述突变型IL15的氨基酸序列如SEQ  ID NO:1所示。 [0008]本发明的第二方面涉及一种分离的核酸， 其表达得到如上 所述的融合蛋白。 [0009]本发明的第三方面涉及含有如上 所述核酸的载体。 [0010]本发明的第四方面涉及分离 的宿主细胞， 其包含如上所述的融合蛋白， 或包含如 上所述的核酸， 或被如上 所述的载体所转 化。 [0011]本发明的第五方面涉及药用组合物， 其包 含如上所述的宿主细胞。 [0012]本发明的第六方面涉及如上所述的宿主细胞在制备用于预防和/或治疗肿瘤的药 物中的应用。 [0013]本发明提供了同时表达CAR和突变型IL15的融合蛋白及其在肿瘤治疗方面的应说　明　书 1/8 页 3 CN 113549158 B 3