(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202111023188.8 (22)申请日 2021.08.25 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 113929752 A (43)申请公布日 2022.01.14 (73)专利权人 天津大学 地址 300350 天津市津南区海河教育园雅 观路135号天津大 学北洋园校区 (72)发明人 王跃飞　齐崴　王子瑄　苏荣欣　 (74)专利代理 机构 天津市北洋 有限责任专利代 理事务所 12 201 专利代理师 陆艺 (51)Int.Cl. C07K 14/00(2006.01) C12N 15/87(2006.01)A61K 9/127(2006.01) A61K 31/7088(2006.01) A61K 31/713(2006.01) A61K 47/42(2017.01) A61P 35/00(2006.01) 审查员 刘珊 (54)发明名称 具有双途径抑制癌细胞作用的复合物囊泡 及制备方法与应用 (57)摘要 本发明公开了具有双途径抑制癌细胞作用 的复合物囊泡及制备方法与应用， 复合物囊泡的 制备方法是： 将具有酶响应位点的多肽放入无核 酸酶水中， 超声使溶解， 制备得溶液一； 加入溶剂 是无核酸酶水的具有抗癌作用的基因药物溶液， 使质子化氮与磷酸基团的摩尔比为3 ‑50； 在室温 下组装， 得到具有双途径抑制癌细胞作用的复合 物囊泡。 本发 明的复合物囊泡可通过双重途径对 癌细胞的生长进行抑制。 本发明的具有酶响应位 点的多肽使具有抗癌作用的基因药物的转染效 率高达99.3％， 且具有双途径抑制癌细胞作用的 复合物囊泡能够在基本不伤害正常细胞的情况 下导致癌细胞最高96％的死亡率。 权利要求书1页 说明书7页 序列表2页 附图4页 CN 113929752 B 2022.07.29 CN 113929752 B 1.一种具有酶响应位点的多肽， 其特征是包括阳离子多肽片段， 所述阳离子多肽片段 依次与癌细胞高表达酶响应位 点、 疏水片段和靶向区域连接； 所述阳离 子多肽片段的氨基酸序列为K KK； 所述癌细胞高表达酶响应位 点的氨基酸序列为PLGL； 所述疏水片段的氨基酸序列为A ‑Acp‑LLLLLLLLGSPD； 所述Acp为6 ‑氨基己酸； 所述靶向区域的氨基酸序列为RGD； 所述具有酶响应位 点的多肽的氨基酸序列如SEQ  ID NO.7所示。 2.一种具有双途径抑制癌细胞作用的复合物囊泡的制备方法， 其特征是包括如下步 骤： 将权利要求1的具有酶响应位点的多肽放入无核酸酶水中， 超声使溶解， 制备获得浓度 为0.1‑1mg/mL的溶液为溶液一； 加入溶剂是无核酸酶水的具有抗癌作用的基因药物溶液， 使质子化氮与磷酸基团的摩尔比为3 ‑50； 在室温下组装30 ‑60min， 得到具有双途径抑制癌 细胞作用的复合物囊泡； 所述具有抗癌作用的基因药物为第一种siRNA、 第二种siRNA、 第三种siRNA或P5 3质粒； 所述第一种 siRNA正义链核苷酸序列如SEQ  ID NO.1所示； 所述第一种 siRNA反义链核 苷酸序列如SEQ  ID NO.2所示； 所述第二种siRNA正义链核苷酸序列如SEQ  ID NO.3所示； 所 述第二种siRNA反义链核苷酸序列如SEQ  ID NO.4所示； 所述第三种siRNA正义链核苷酸序 列如SEQ ID NO.5所示； 所述第三种siRNA反义链核苷酸序列如SEQ  ID NO.6所示。 3.权利要求2的制备 方法制备的一种具有双途径抑制癌细胞作用的复合物囊泡。 4.权利要求3的一种具有双途径抑制癌细胞作用的复合物囊泡在制备核酸转染试剂中 的应用。 5.权利要求3的一种具有双途径抑制癌细胞作用的复合物囊泡在制备抗癌药物中的应 用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 113929752 B 2具有双途径抑制癌细胞作用的 复合物囊泡及制备方 法与应用 技术领域 [0001]本发明属于生物医药领域， 具体涉及一种具有双途径抑制癌细胞作用的复合物囊 泡及制备 方法与应用。 背景技术 [0002]目前， 癌症仍然是人类最致命的杀手之一， 随着生态环境的日益恶化， 致病率不断 上升， 并且由于癌细胞转移导致的死亡人数也在不断的增加。 虽然有许多资源用于治疗这 一疾病， 但目前所取得的成就并不令人满意。 放射治疗、 化疗和生物治疗是癌症治疗的主要 方式。 其中， 放射治疗和化疗是临床治疗癌症最常用的治疗方案。 然而在化疗中， 无论是 口 服还是静脉注射， 均只有少量有效的药物分子可以循环到达病变部位， 大多数药物分子则 被正常组织摄取。 这导致药物利用效率低， 对正常组织的毒副作用大， 且需要频繁给药， 而 这种频繁给药会促使癌细胞产生耐药性。 因此， 对癌细胞具有靶向性并且对正常细胞没有 毒性的抗癌药物的开发刻不 容缓。 [0003]生物治疗则是一种新兴的治疗方法， 它因为其生物活性和低 毒性被广泛应用在抗 癌方面。 生物治疗通常是通过基因药物抑制与肿瘤生长有关的特定 分子来抑制癌细胞的生 长。 然而单独的基因药物在体内很容易被水解， 所以基因药物的递送需要载体的保护。 全球 研究人员已经广泛地尝试开发多功能载体， 以确保基因药物 能够精准的传递到作用部位。 到目前为止， 许多纳米材料已被设计和评价为癌症治疗药物的载体。 多肽分子作为药物、 基 因的载体材料， 因其独特 的优势而备受人们的关注。 然而多肽序列的精准设计以及如何帮 助基因药物成功逃逸溶酶体是多肽作为载体面临的主要困难。 并且目前已开 发的多肽载体 均只从递送基因药物这一单一途径抑制癌细胞。 由于癌细胞基因易突变、 易获得耐药性等 特点， 只从单一途径抑制癌细胞是远远不够的。 目前尚未有以多肽和基因药物组装得到具 有双途径抑制癌细胞作用的复合物囊泡的报道。 发明内容 [0004]本发明的目的是 克服现有技 术的不足， 提供一种具有酶响应位 点的多肽。 [0005]本发明的第二个目的是提供一种具有双途径抑制癌细胞作用的复合物囊泡。 [0006]本发明的第三个目的是提供一种具有双途径抑制癌细胞作用的复合物囊泡的制 备方法。 [0007]本发明的第四个目的是提供一种具有双途径抑制癌细胞作用的复合物囊泡在制 备核酸转染试剂中的应用。 [0008]本发明的第五个目的是提供一种具有双途径抑制癌细胞作用的复合物囊泡在制 备抗癌药物中的应用。 [0009]本发明的技 术方案概 述如下： [0010]一种具有酶响应位点的多肽， 包括阳离子多肽片段， 阳离子多肽片段依次与癌细 胞高表达酶响应位 点、 疏水片段和靶向区域连接；说　明　书 1/7 页 3 CN 113929752 B 3