(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202110835320.9 (22)申请日 2021.07.23 (66)本国优先权数据 202110405893.8 2021.04.15 CN (71)申请人 武汉大学 地址 430072 湖北省武汉市武昌区珞珈山 武汉大学 (72)发明人 贾荣　郭继华　 (74)专利代理 机构 武汉科皓知识产权代理事务 所(特殊普通 合伙) 42222 专利代理师 常海涛 (51)Int.Cl. C12N 15/113(2010.01) A61K 31/711(2006.01) A61K 31/7115(2006.01)A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 促进PD-L1外显子3跳跃的反义寡核苷酸及 其应用 (57)摘要 本发明公开了促进PD ‑L1外显子3跳跃的反 义寡核苷酸及其应用， 属于分子遗传学领域。 本 发明发现了人PD ‑L1外显子3剪接的关键调控序 列， 并研制了抑制该外显子剪接的反义寡核苷 酸， 通过促进癌细胞的PD ‑L1外显子3跳跃， 可以 使PD‑L1失去与PD ‑L1结合的能力和免疫抑制功 能， 从而可以抑制肿瘤免疫逃逸， 以进一步提高 抗PD‑L1抗体的免疫治疗的效果。 本发明反义寡 核苷酸的序列包含与Genbank号为NM_014143.4 的PD‑L1基因的第325 ‑344位/第405 ‑424位的碱 基或其对应的mRNA具有90％以上互补的反义寡 核苷酸序列。 权利要求书1页 说明书5页 序列表20页 附图6页 CN 115216474 A 2022.10.21 CN 115216474 A 1.一种反义寡核苷酸， 其特 征在于， 其序列包 含： 与序列为CGGCTGTTGAAGGACCAGCT的碱基或其对应的mRNA具有90％以上的互补的反义 寡核苷酸序列； 和/或， 与序列为CCGCTGCATGATCAGCTATG的碱基或其对应的mRNA具有90％以上的互补的反义 寡核苷酸序列。 2.根据权利要求1所述的反义寡核苷酸， 其特征在于， 其序列包含至少一个序列如SEQ   ID No.102～122所示的反义寡核苷酸序列； 优选地， 其序列包 含如下至少一个反义寡核苷酸序列： 5’ ‑AGCTGGTCCTTCAACAGCCG‑3’； 5’ ‑CATAGCTGATCATGCAGCG G‑3’。 3.根据权利要求1或2所述的反义寡核苷酸， 其特征在于， 其所有碱基都经2' ‑甲氧乙基 和硫代修饰。 4.一种组合物， 其特征在于， 其包括权利要求1 ‑3中任一项所述的反义寡核苷酸和药学 上可接受的赋 形剂。 5.根据权利要求4所述的组合物， 其特征在于， 所述组合物被配制成与抗PD ‑L1抗体联 合给药。 6.权利要求1‑3中任一项所述的反义寡核苷酸在制备促进PD ‑L1外显子3跳跃的药物中 的应用。 7.权利要求1 ‑3中任一项所述的反义寡核苷酸在制备抑制PD ‑L1和PD‑1结合的药物中 的应用。 8.权利要求1 ‑3中任一项所述的反义寡核苷酸在制备降低PD ‑L1免疫抑制功能的药物 中的应用。 9.权利要求1 ‑3中任一项所述的反义寡核苷酸在制备治疗肿瘤的药物中的应用， 其特 征在于， 所述肿瘤的细胞表达P D‑L1。 10.根据权利要求9所述的应用， 其特征在于， 所述肿瘤包括口腔癌、 乳腺癌、 肺癌、 宫颈 癌、 咽癌、 骨髓瘤。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115216474 A 2促进PD‑L1外显子3 跳跃的反义寡核 苷酸及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及分子遗传学领域， 具体涉及促进PD ‑L1外显子3跳跃的反义寡核苷酸及 其应用。 背景技术 [0002]在肿瘤形成发展过程中会出现新的肿瘤抗原。 机体免疫系统可识别这些抗原并抑 制肿瘤发展。 但肿瘤细胞利用免疫系统的抑制性信号通路分子， 如PD ‑L1、 PD‑1和CTLA4等， 来诱导免疫抑制和逃避免疫系统的监控。 肿瘤细胞和免疫抑制细胞表达的PD ‑L1与T细胞 (特别是CD8+效应T细胞)的PD ‑1结合， 传递免疫抑制信号， 抑制效应T细胞的增殖、 活化和对 肿瘤细胞的杀伤。 抗PD ‑L1抗体的免疫治疗方法已被用于多种癌症治疗中， 有明显的治疗作 用， 但目前还面临较多问题。 很多患者对抗PD ‑L1抗体治疗始终没有反应， 或开始有反应， 但 在后续治疗中没有反应， 出现免疫 逃逸， 导致疾病进展或复发。 目前国内外学者们主要是通 过优化抗PD ‑L1抗体治疗方案和与其它方法联合治疗来提高抗PD ‑L1抗体的免疫治疗效果， 但仍很不理想， 急需新的技 术方法。 [0003]PD‑L1基因的外显子3编码能与PD ‑1结合的关键IgV样功能区， 并在mRNA剪接过程 中可能被跳过去(图1)。 在文献 “Identification  of a novel splice variant of human  PD‑L1 mRNA encoding  an isoform‑lacking Igv‑like domain”中提到不含外显子3(在该 文献中定义为外显子2)的PD ‑L1表达在细胞内， 而不是细胞膜上。 而PD ‑L1必须表达在细胞 表面才能与其配体PD ‑1结合和发挥免疫抑制作用， 也就是说， 不含外显子3的PD ‑L1会失去 与PD‑L1结合的能力和免疫抑制功能。 因此通过促进癌细胞的PD ‑L1外显子3跳跃， 可以减少 包含外显子3的有免疫抑制功能的PD ‑L1的产生， 进而抑制肿瘤免疫逃逸。 但目前外显子3跳 跃的调控机制还不清楚， 也没有相关的抗P D‑L1方法。 发明内容 [0004]为了解决上述问题， 本发明经过研究发现了人PD ‑L1外显子3剪接的关键调控序 列， 并提供了促进P D‑L1外显子3跳跃的反义寡核苷酸及其应用。 [0005]具体而言， 本发明首 先提供了一种反义寡核苷酸， 其序列包 含： [0006]与Genbank号为NM_014143 .4的PD ‑L1基因的第325 ‑344位的碱基 (CGGCTGTTGAAGGACCAGCT)或其对应的mRNA具有90％以上互补的反义寡核苷酸序列； 和/或， [0007]与Genbank号为NM_014143 .4的PD ‑L1基因的第405 ‑424位的碱基 (CCGCTGCATGATCAGCTATG)或其对应的mRNA具有90％以上的互补的反义寡核苷酸序列。 [0008]由于单个基因的序列的版本较多， 不同版本中起始碱基的位置可能不一致。 因此， 为了便于说明碱基序列， 本发明中以Genbank号为NM_014143.4的PD ‑L1基因为基准进行了 界定， 实际上， 本领域人员可根据上述界定， 在其他版本的PD ‑L1基因序列中找到对应的碱 基序列， 其 也在本发明的保护范围内。 [0009]作为优选， 所述的反义寡核苷酸的序列包含至少一个序列如SEQ  ID No.102～122说　明　书 1/5 页 3 CN 115216474 A 3