(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202110737014.1 (22)申请日 2021.06.30 (71)申请人 苏州方德门达新药开发有限公司 地址 215200 江苏省苏州市吴江区长安路 2358号吴江科技创业园7栋4楼 (72)发明人 李俊　张鹏潮　张银航　 (74)专利代理 机构 上海专利商标事务所有限公 司 31100 专利代理师 陶启长 (51)Int.Cl. C07K 14/725(2006.01) C07K 16/28(2006.01) C12N 15/867(2006.01) C12N 15/62(2006.01) C12N 5/10(2006.01)A61K 39/395(2006.01) A61K 39/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) G01N 33/577(2006.01) G01N 33/68(2006.01) (54)发明名称 介导细胞内有效滞留CD3的空间构象表 位及 其应用 (57)摘要 本发明涉及介导细胞内有效滞留CD3的空间 构象表位及其应用。 具体地， 本发明提供CD3ε的 表位肽、 与其特异性结合的抗体或其抗原结合片 段及其应用。 本发明可以将含有CD3ε的分子有 效滞留在细胞内， 降低移植物抗宿主反应 。 权利要求书2页 说明书18页 序列表10页 附图3页 CN 115536740 A 2022.12.30 CN 115536740 A 1.一种CD3 ε 的表位肽， 包 含SEQ ID NO:1的第5 6、 61、 62、 101、 104和107位氨基酸， 优选地， 所述表位肽是空间表位肽， 优选地， 所述表位肽还 包含SEQ ID NO:1的第54、 5 5、 60、 64和69位氨基酸， 更优选地， 所述表位肽包含SEQ  ID NO:1的氨基酸56 ‑107， 或包含SEQ  ID NO:1的氨基 酸54‑107。 2.一种CD3 ε 的表位肽， 所述表位肽 如下式(I)所示： X1X2…X55EX57…X60HNX63…X100RX102X103KX105X106DX108…X207 (I) 其中， X1‑X55和X108‑X207中各X独立地是任何氨基酸或无， 其余X各自独立地是任何氨基 酸， 优选地， 所述表位肽 如下式(I II)所示： X54X55EX57…X60HNX63…X100RX102X103KX105X106D (III) 其中， X54和X55各自独立 地是任何氨基酸或无， 其 余X各自独立 地是任何氨基酸， 或者 优选地， 所述表位肽 如下式(IV)所示： GSEX57X58X59QHNX63KX65…X68DX70…X100RX102X103KX105X106D (IV) 其中， X各自独立 地是任何氨基酸， 更优选地， 所述表位肽是SEQ  ID NO:1的包含氨基酸56、 61、 62、 101、 104和107， 和任选 的氨基酸54、 55、 60、 64和69的片段， 或， 所述表位肽是SEQ  ID NO:1的包含氨基酸56 ‑107的 片段或SEQ  ID NO:1的包 含氨基酸54 ‑107的片段。 3.权利要求1或2所述的表位肽在制备CD3ε特异性抗体或其抗原结合片段或表达CD3ε 特异性抗体或其 抗原结合片段的细胞中的用途。 4.一种制备表达 CD3 ε特异性 抗体或其 抗原结合片段的细胞的方法， 所述方法包括： (1)用权利要求1或2所述的表位肽或包 含所述表位肽的重组抗原免疫动物， (2)使动物脾细胞与骨髓瘤 细胞融合， 获得表达所述 抗体或其 抗原结合片段的细胞， 或者 (1)用权利要求1或2所述的表位肽或包 含所述表位肽的重组抗原免疫动物， (2)以动物的分泌抗体的B细胞的核酸为模板， 扩增 获得抗体的重链和/或轻链可变区 的基因序列， 和 (3)在细胞中重组表达所述抗体或其抗原结合片段， 获得表达抗体或其抗原结合片段 的细胞， 优选地， 所述动物是小鼠、 大鼠、 羊、 兔、 狗、 猴。 5.一种制备抗体或其结合片段的方法， 包括： 培养由权利要求4所述方法制备的细胞和 任选的收集 抗体或其结合片段。 6.一种结合如权利要求1或2所述的CD3 ε 的表位肽的抗体或其 抗原结合片段， 优选地， 所述抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区， 其中， 所述重链可 变区具有下述H CDR： 如SEQ ID NO:2所示的H CDR1： GYTFISYT，权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115536740 A 2如SEQ ID NO:3所示的H CDR2： TNPRSGYT， 如SEQ ID NO:4所示的H CDR3： AKTGY YDYHAFAY， 所述轻链可变区具有下述 LCDR： 如SEQ ID NO:5所示的LCDR 1： SSVSY， 如SEQ ID NO:6所示的LCDR2： DTS， 如SEQ ID NO:7所示的LCDR3： Q QWSSQPPT， 优选地， 所述抗体或其抗原结合片段还包含定位序列； 更优选地， 所述定位序列选自内 质网滞留序列， 高尔基体滞留序列， E3泛素连接酶结合序列， 蛋白酶体定位序列或溶酶体定 位序列。 7.一种核酸分子， 其具有权利要求1或2所述的表位肽和/或权利要求4或5所述的抗体 或其抗原结合片段的编码序列或其互补序列。 8.一种细胞， 其： (1)表达权利要求6所述的抗体或其 抗原结合片段， 和/或 (2)含有权利要求7 所述的核酸分子 。 9.一种药物组合物， 包含权利要求6所述的抗体或其抗原结合片段、 权利要求7所述的 核酸分子和/或权利要求8所述的细胞， 以及药 学上可接受的辅料。 10.权利要求6所述的抗体或其抗原结合片段、 权利要求7所述的核酸分子和/或权利要 求8所述的细胞在制备嵌合抗原受体T细胞、 癌症治疗用T细胞、 特异检测CD 3 ε 的试剂或疫苗 中的应用。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115536740 A 3