(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202110726683.9 (22)申请日 2021.06.29 (71)申请人 三生国健药业 （上海） 股份有限公司 地址 201203 上海市浦东 新区中国 （上海） 自由贸易试验区李冰路39 9号 (72)发明人 赵杰　黄浩旻　朱祯平　 (74)专利代理 机构 上海一平知识产权代理有限 公司 3126 6 专利代理师 徐迅　马莉华 (51)Int.Cl. C07K 16/46(2006.01) A61K 39/395(2006.01) A61K 47/68(2017.01) A61P 35/00(2006.01) (54)发明名称 三特异性 抗体、 其制备方法和用途 (57)摘要 本发明提供了一种结构新颖的六价三特异 性抗体。 本发 明中的六价三特异性抗体具有良好 的稳定性， 不需要进行Fc修饰， 不会产生错配问 题， 制备方法简便， 并且与单抗相似甚至更优的 生物学活性和理化 性质。 权利要求书3页 说明书21页 序列表23页 附图9页 CN 115536749 A 2022.12.30 CN 115536749 A 1.一种六价三特异性抗体， 其特征在于， 所述的六价三特异性抗体为二个单体形成的 二聚体， 其中， 每 个单体包 含重链、 第一轻链和第二轻链； 所述的重链从N端至C端包括串联的针对第一靶标的抗体重链可变区元件Z1、 针对第二 靶标的抗体重链可变区元件Z2、 针对第三靶标的抗体重链可变区元件Z3以及抗体重链恒定 区Z4； 所述的第一轻链和第 二轻链分别与 所述重链配合， 使得所述的六价三特异性抗体特异 性结合于第一靶标、 第二靶标和第三靶标。 2.如权利要求1所述的六价三特异性抗体， 其特征在于， 包含重链、 第一轻链和第二轻 链； 其中， 每 个所述的重链具有下式I的结构： Z1‑Z2‑Z3‑Z4       (I) Z1为针对第一靶标的重链可变区元件； Z2为针对第二靶标的重链可变区元件； Z3为针对第三靶标的重链可变区元件； Z4为抗体重链恒定区C H1、 CH2和CH3； “‑”各自独立 地为键或接 头(linker)； 其中， 所述的第一轻链和第二轻链分别与重链配合， 使得所述的六价三特异性抗体特 异性结合于第一靶标、 第二靶标和第三靶标； 所述第一轻链具有下式I I的结构： Z5‑Z6  (II)； 其中， Z5为针对第一靶标的轻链可变区元件； Z6为针对第二靶标的轻链可变区元件； 所述第二轻链具有下式I II的结构： Z7‑Z8  (III)； 其中， Z7为针对第三靶标的轻链可变区元件； Z8为轻链恒定区。 3.如权利要求1或2所述的六价三特异性抗体， 其特征在于， 所述第一靶标、 第 二靶标和 第三靶标为P D‑1、 HER‑2和LAG‑3。 4.如权利要求1 ‑3中任一项所述的六价三特异性抗体， 其特征在于， 所述的接头为长度 为1‑35个氨基酸的肽接 头， 较佳地6 ‑30个氨基酸的肽接 头。 5.如权利要求1 ‑4中任一项所述的六价三特异性抗体， 其特征在于， 所述六价三特异性 抗体包含两个单体， 每个单体含有重链和第一轻链、 和第二轻链， 其中每个单体具有 下式IV 结构： 式中， VHA‑L1‑VHB‑L2‑VHC‑CH1‑CH2‑CH3为重链； VLA‑L3‑VLB为第一轻链； VLC‑CL为第二轻链； VHA为抗PD‑1抗体的重链可变区；权　利　要　求　书 1/3 页 2 CN 115536749 A 2VHB为抗HER‑2抗体的重链可变区； VHC为抗LAG‑3抗体的重链可变区； CH1、 CH2和CH3分别为抗体重链恒定区C H1、 CH2和CH3； VLA为抗PD‑1抗体的轻链可变区； VLB为抗HER‑2抗体的轻链可变区； VLC为抗LAG‑3抗体的轻链可变区； CL为抗体的轻链恒定区； L1、 L2、 L3各自独立 地为接头(linker)； “‑”各自独立 地为键； “～”代表二硫键或共价键； 其中， 所述的六价 三特异性 抗体同时结合于P D‑1、 HER‑2和LAG‑3。 6.如权利要求1 ‑5中任一项所述的六价三特异性抗体， 其特征在于， 所述接头为柔性肽 接头； 其中， 所述的柔 性肽接头包括6‑30个氨基酸， 较佳地10 ‑25个氨基酸。 7.如权利要求1 ‑6中任一项所述的六价三特异性抗体， 其特征在于， 所述的六价三特异 性抗体包含两条重链、 两条第一轻链和两条第二轻链， 其中， 所述的六价三特异性抗体中的重链、 第一轻链和第二轻链的氨基酸序列分别如 SEQ ID No:14、 15和13所示； 或 所述的六价三特异性抗体中的重链、 第一轻链和第二轻链的氨基酸序列分别如SEQ  ID  No:16、 17和13所示； 或 所述的六价三特异性抗体中的重链、 第一轻链和第二轻链的氨基酸序列分别如SEQ  ID  No:18、 19和13所示。 8.一种分离的核酸分子， 其特征在于， 所述的核酸分子编码如权利要求1 ‑7中任一项所 述的六价 三特异性 抗体。 9.一种表达载体， 其特 征在于， 所述的表达载体含有如权利要求8所述的核酸分子 。 10.一种宿主细胞， 其特 征在于， 所述的宿主细胞含有如权利要求9所述的表达载体。 11.如权利要求1 ‑7中任一项所述的六价三特异性抗体的制备方法， 其特征在于， 所述 方法包含以下步骤： (a)在表达条件下， 培养如权利 要求10所述的宿主细胞， 从而表达所述的六价三特异性 抗体； (b)分离并纯化(a)所述的六价 三特异性 抗体。 12.一种药物组合物， 其特征在于， 所述药物组合物含有如权利要求1 ‑7中任一项所述 的六价三特异性 抗体和药 学上可接受的载体。 13.如权利要求1 ‑7中任一所述的六价三特异性抗体或如权利要求12所述的药物组合 物在制备治疗癌症的药物中的用途。 14.如权利要求13所述的用途， 其特征在于， 所述癌症选自下组： 黑素瘤、 肾癌、 前列腺 癌、 胰腺癌、 乳腺癌、 结肠癌、 肺癌、 食道癌、 头颈鳞状细胞癌、 肝癌、 卵巢癌、 宫颈癌、 甲状腺 癌、 成胶质细胞瘤、 神经胶质瘤 及其它赘 生性恶性疾病。 15.一种免疫偶联物， 其特 征在于， 所述免疫偶联物包括： (a)如权利要求1 ‑7中任一项中所述的六价 三特异性 抗体； 和权　利　要　求　书 2/3 页 3 CN 115536749 A 3