(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202110783589.7 (22)申请日 2021.07.12 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 113402619 A (43)申请公布日 2021.09.17 (66)本国优先权数据 202110739305.4 2021.0 6.30 CN (73)专利权人 徐州医科 大学 地址 221004 江苏省徐州市铜山路209号 (72)发明人 李慧忠　郑骏年　王刚　刘宜林　 党元元　 (74)专利代理 机构 北京预立 生科知识产权代理 有限公司 1 1736 代理人 李红伟　孟祥斌 (51)Int.Cl. C07K 19/00(2006.01) C12N 15/62(2006.01) C12N 15/867(2006.01) C12N 5/10(2006.01) A61K 39/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) A61P 35/02(2006.01)(56)对比文件 CN 109880804 A,2019.0 6.14 WO 2020047449 A2,2020.0 3.05 WO 2021127428 A1,2021.0 6.24 CN 111247168 A,2020.0 6.05 CN 112521512 A,2021.0 3.19 CN 109562126 A,2019.04.02 张贵珍， 等.靶向B7- H3的CAR-T细胞在实体 瘤免疫治疗的研究进 展. 《中国免疫学杂志》 .2021, Hongwei Du， 等.Antitumor Respo nses in the Absence of Toxicity i n Solid Tumors by Targeti ng B7-H3 via Chimeric Antigen Receptor T Cel ls. 《Cancer Cel l》 .2019,第25 卷(第2期), Zongliang Zhang， 等.B7- H3-Targeted CAR-T Cel ls Exhibit Potent Antitumor Effects on Hemato logic and So lid Tumors. 《Molecular Therapy Onco lytics》 .2020,第17 卷 审查员 王康 (54)发明名称 一种靶向B7H3共表达IL-21的全人源嵌合抗 原受体、 i NKT细胞及其用途 (57)摘要 本发明公开了一种靶向B7H3共表达IL ‑21的 全人源嵌合抗原受体、 iNKT细胞及其用途， 所述 嵌合抗原受体包含B7H3抗原结合结构域、 跨膜结 构域、 细胞内信号结构域以及IL ‑21， 经实验验证 本发明制备得到的靶向B7H3的B7H3.CAR/IL ‑21‑ iNKT细胞具有较强的细胞因子释放能力和肿瘤 细胞杀伤能力， 能够有效清除肿瘤细胞， 在肿瘤 细胞免疫 治疗领域具有重要的应用前 景。 权利要求书3页 说明书9页 序列表9页 附图4页 CN 113402619 B 2022.03.22 CN 113402619 B 1.一种靶向B7H3的全人源嵌合抗原受体， 其特征在于， 所述嵌合抗原受体包括与B7H3 特异性结合 抗体scFv； 所述嵌合 抗原受体还 包括跨膜结构域、 胞内信号传导结构域； 所述嵌合 抗原受体还 包括铰链区； 所述嵌合 抗原受体还 包括共刺激信号结构域； 所述嵌合 抗原受体还 包括信号肽； 所述嵌合 抗原受体还 包括自裂解肽； 所述嵌合 抗原受体还 包括免疫调节分子或细胞因子； 所述scFv的氨基酸序列如SEQ  ID NO:1所示的氨基酸序列； 所述跨膜结构域和铰链区为CD 8α 跨膜结构域和CD 8α 铰链区； 所述CD8α 跨膜结构域的氨基酸序列如SEQ  ID NO:2所示； 所述CD8α 铰链区的氨基酸序列如SEQ  ID NO:3所示； 所述胞内信号传导结构域 为CD3ζ 胞内信号传导结构域； 所述CD3ζ 胞内信号传导结构域的氨基酸序列如SEQ  ID NO:4所示； 所述共刺激信号结构域 为CD28共刺激信号结构域； 所述CD28共刺激信号结构域的氨基酸序列如SEQ  ID NO:5所示； 所述信号肽为 IgG6信号肽； 所述IgG6信号肽的氨基酸序列如SEQ  ID NO:6所示； 所述自裂解肽为T2 A； 所述T2A的氨基酸序列如SEQ  ID NO:7所示； 所述免疫调节分子或细胞因子为 IL‑21； 所述IL‑21的氨基酸序列如SEQ  ID NO:8所示； 所述嵌合抗原受体由IgG6信号肽、 scFv、 CD8α铰链区、 CD8α跨膜结构域、 CD28共刺激信 号结构域、 CD3ζ 胞内信号传导结构域、 T2 A、 IL‑21的融合蛋白依次连接 。 2.根据权利要求1所述的嵌合抗原受体， 其特征在于， 所述嵌合抗原受体的氨基酸序列 如SEQ ID NO:9所示。 3.一种多核苷酸， 其特征在于， 所述多核苷酸的序列为含依次连接的靶向B7H3的嵌合 抗原受体的编码序列、 或其互补序列； 所述靶向B7H3的嵌合抗原受体的编码序列包含依次连接的IgG6信号肽的编码序列、 scFv的编码序列、 CD8α 铰链区的编码序列、 CD8α 跨膜结构域的编码序列、 CD28共刺激信号结 构域的编码序列、 CD3ζ胞内信号传导结构域的编码序列、 T2A的编码序列、 IL ‑21的编码序 列； 所述IgG6信号肽的编码序列如SEQ  ID NO:10所示； 所述scFv的编码序列如SEQ  ID NO:11所示； 所述CD8α 铰链区的编码序列如SEQ  ID NO:12所示； 所述CD8α 跨膜结构域的编码序列如SEQ  ID NO:13所示； 所述CD28共刺激信号结构域的编码序列如SEQ  ID NO:14所示； 所述CD3ζ 胞内信号传导结构域的编码序列如SEQ  ID NO:15所示； 所述T2A的编码序列如SEQ  ID NO:16所示；权　利　要　求　书 1/3 页 2 CN 113402619 B 2所述IL‑21的编码序列如SEQ  ID NO:17所示。 4.根据权利要求3所述的多核苷酸， 其特征在于， 所述靶向B7H3的嵌合抗原受体的编码 序列如SEQ  ID NO:18所示。 5.一种含有权利要求3或4所述多核苷酸的载体， 其特征在于， 所述载体包括克隆载体、 表达载体。 6.根据权利要求5所述的载体， 其特征在于， 所述载体包括DNA载体、 RNA载体、 质粒、 病 毒来源的载体。 7.根据权利要求6所述的载体， 其特征在于， 所述病毒来源的载体包括慢病毒载体、 逆 转录病毒载体、 腺病毒载体、 腺相关病毒载体、 痘病毒载体、 疱疹病毒载体。 8.根据权利要求7 所述的载体， 其特 征在于， 所述载体为逆转录病毒载体。 9.一种经工程改造的宿主细胞， 其特征在于， 所述经工程改造的宿主细胞含有权利要 求3或4所述的多 核苷酸、 权利要求5所述的载体。 10.根据权利要求9所述的经工程改造的宿主细胞， 其特征在于， 所述宿主细胞包括真 核细胞、 原核细胞。 11.根据权利要求10所述的经工程改造的宿主细胞， 其特征在于， 所述宿主细胞为真核 细胞。 12.根据权利要求11所述的经工程改造的宿主细胞， 其特征在于， 所述真核细胞包括哺 乳动物细胞、 植物细胞、 酵母细胞。 13.根据权利要求12所述的经工程改造的宿主细胞， 其特征在于， 所述真核细胞为免疫 细胞。 14.根据权利要求13所述的经工程改造的宿主细胞， 其特征在于， 所述免疫细胞包括T 细胞、 B细胞、 NK细胞、 iNKT细胞、 CTL细胞、 树突状细胞、 髓样细胞、 单核细胞、 巨噬细胞或其 任意组合。 15.根据权利要求14所述的经工程改造的宿主细胞， 其特征在于， 所述免疫细胞为iNKT 细胞。 16.一种药物组合物， 其特征在于， 所述药物组合物包含权利要求3或4所述的多核苷 酸、 权利要求5所述的载体、 权利要求9所述的经工程改造的宿主细胞。 17.根据权利要求16所述的药物组合物， 其特征在于， 所述药物 组合物还包括一种或多 种药学或生理学 上可接受的载体、 稀释剂或赋 形剂组合。 18.一种试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒包含权利要求3或4所述的多核苷酸、 权利要 求5所述的载体。 19.根据权利要求18所述的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒还包括将所述多核苷酸、 载体引入到宿主细胞中的试剂。 20.根据权利要求18所述的试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒还包括将所述多核苷酸、 载体引入到宿主细胞中的说明书。 21.一种含有权利要求9所述经工程改造的宿主细胞的生物制剂。 22.一种制备权利要求9所述经工程改造的宿主细胞的方法， 其特征在于， 所述方法包 括如下步骤： 将权利要求3或4所述的多 核苷酸、 权利要求5所述的载体引入到宿主细胞中。 23.根据权利要求22所述的方法， 其特征在于， 所述引入的方法包括脂质转染法、 微注权　利　要　求　书 2/3 页 3 CN 113402619 B 3