(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202110809125.9 (22)申请日 2021.07.16 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 113637078 A (43)申请公布日 2021.11.12 (73)专利权人 四川大学华西医院 地址 610041 四川省成 都市武侯区国学巷 37号 (72)发明人 张臣良　毕锋　 (74)专利代理 机构 成都科海专利事务有限责任 公司 51202 专利代理师 刘业芳 (51)Int.Cl. C07K 16/40(2006.01) C12N 15/13(2006.01)C12N 15/70(2006.01) C12N 1/21(2006.01) G01N 33/573(2006.01) A61K 39/395(2006.01) A61P 3/10(2006.01) A61P 37/00(2006.01) A61P 25/00(2006.01) A61P 35/00(2006.01) C12R 1/21(2006.01) 审查员 杨振宇 (54)发明名称 一种针对蛋白激酶p38δ的纳米抗体、 核酸、 表达载体、 宿主细胞及其应用 (57)摘要 本发明提供了一种针对蛋白激酶p38δ的纳 米抗体、 核酸、 表达载体、 宿主细胞及其应用， 所 述纳米抗体具有至少一种以下所示的互补决定 区： 如SEQIDNO.1所示氨基酸序列的互补 决定区 CDR1； 如SEQIDNO.2所示氨基酸序列的互补决定 区CDR2； 和如SEQIDNO.3所示氨基酸序列的互补 决定区CDR3。 此纳米抗体具有针对蛋白激酶p38 δ独特的抗原互补决定区， 对蛋白激酶p38δ显 示出了高度特异的结合活性， 能够有效抑制p38 δ蛋白激酶的活性。 且不与p38MAPK的其他家族 蛋白p38α、 p38γ和p38δ发生交叉反应 。 权利要求书1页 说明书6页 序列表6页 附图3页 CN 113637078 B 2022.10.25 CN 113637078 B 1. 一种特异性结合蛋白激酶p38δ的纳米抗体， 其特征在于， 所述纳米抗体具有如SEQ   ID NO.1所示氨基酸序列的互补决定区CDR1、 如SEQ  ID NO.2所示氨基酸序列的互补决定区 CDR2和如SEQ  ID NO.3所示氨基酸序列的互补决定区CDR3 。 2.根据权利要求1所述的特异性结合蛋白激酶p38δ 的纳米抗体， 其特征在于， 所述纳米 抗体具有如SEQ  ID NO.7所示的氨基酸序列。 3.一种编码权利要求1或2所述的特异性结合蛋白激酶p38δ 的纳米抗体的核酸， 其特征 在于， 所述核酸能够编码如SEQ  ID NO.1所示氨基酸序列、 如SEQ  ID NO.2所示氨基酸序列 和如SEQ ID NO.3所示氨基酸序列。 4.根据权利要求3所述的核酸， 其特征在于， 所述核酸具有如SEQ  ID NO.4所示的编码 序列、 如SEQ  ID NO.5所示的编码序列和如SEQ  ID NO.6所示的编码序列。 5.根据权利要求4所述的核酸， 其特征在于， 所述核酸具有如SEQ  ID NO.8所示的编码 序列。 6.一种含有权利要求3至5任一项所述的编码特异性结合蛋白激酶p38δ的纳米抗体的 核酸的表达载体， 其特征在于， 所述表达载体包括原核生物表达载体、 真核生物表达载体或 体外表达载体系统。 7.根据权利要求6所述的表达载体， 其特 征在于， 所述表达载体为pET2 2b。 8.一种含有权利要求6或7所述的表达载体的宿主细胞， 其特征在于， 所述宿主细胞包 括原核生物细胞或真核生物细胞。 9.权利要求1所述的特异性结合蛋白激酶p38δ的纳米抗体在制备用于检测蛋白激酶 p38 δ 的试剂盒中的应用。 10.权利要求1所述的特异性结合蛋白激酶p38δ的纳米抗体在制备抑制蛋白激酶p38δ 活性的药物中的应用， 其特 征在于， 所述药物包括蛋白激酶p38 δ 活性抑制剂或激动剂。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 113637078 B 2一种针对蛋白激酶p38 δ的纳米抗体、 核酸 、 表达载体、 宿主细 胞及其应用 技术领域 [0001]本发明涉及生物技术领域， 且特别涉及一种针对蛋白激酶p38 δ 的纳米抗体、 核酸、 表达载体、 宿主细胞及其应用。 背景技术 [0002]p38δ是p38  MAPK家族中的一种丝氨酸/苏氨酸特异性蛋白激酶， 主要参与调控细 胞外刺激与细胞内应答之间的信号转导。 p38  MAPK家族共有四个成员， 即p38α、 p38β 、 p38γ 以及p38 δ。 虽然 所有的p38  MAPKs在序列及结构上都 高度保守， 但是他们在生理和病理环境 中的功能却不尽相同。 其中， p38α和p38β 广泛表达于各种细胞和组织， 调控细胞的基本生命 活动。 例如： p38α在白细胞、 肝、 脾、 小脑、 骨髓、 甲状腺及胎盘中具有较高的表达水平； p38β 主要在脑和心脏中进行表达。 而p38γ和p38δ的表达具有组织细胞特异性， 并受严格的调 控， p38γ主要在骨骼肌中表达； p38 δ 的表达主要在肺、 肾、 肠、 唾液腺的表皮细胞及睾丸、 卵 巢、 肾上腺和垂体。 近年来研究揭示， p38δ在多种疾病的发生发展中发挥重要的调控功能， 如糖尿病、 免疫疾病、 神经退行性疾病、 癌症等。 p38δ是潜在的疾病诊断生物标志物及治疗 靶点。 在药物研发方面， 由于p38  MAPKs蛋白间高度保守， 开发不与其他p38  MAPK蛋白交叉 反应的p38 δ 特异性抑制剂较为困难， 因此至今尚无有效的p38 δ抑制剂。 [0003]纳米抗体是源于重链抗体可变区域的小 分子抗体， 其分子量约为15kDa， 具有亲和 力高、 稳定性 强、 组织相容性好以及易筛选、 易制备等特点， 近年来在 治疗型药物抗体、 临床 检测型抗体、 科研运用型抗体等方面得到了广泛的研究与发展。 纳米抗体主要 是由4个保守 的骨架区(FR)和3个抗原互补决定区(CDR)依次交叉串 联形成， 其中， 抗原互补决定区(CDR) 是抗原识别 及抗原结合的主要 执行部位。 所以纳米抗体的筛选 关键在于获得可以介导与抗 原特异性结合的互补决定区。 纳米抗体中的互补决定区根据其在整个抗体中的位置不同， 可以依次分为三个独立区域， 即互补决定区1(CDR1)、 互补决定区2(CDR2)和 互补决定区3 (CDR3)。 与传统抗体相比， 纳米抗体互补决定区的氨基酸序列较长， 使得其可以深入抗原较 为隐匿的结构中与其相互作用。 因此除了结合抗原之外， 纳米抗体还 可作为抑制剂、 激动 剂 来改变抗原的活性和功能。 因此， 筛选p38 δ特异性的纳米抗体， 将为p38 δ靶向药物的研发提 供一种新策略。 发明内容 [0004]本发明的第一目的在于提供一种针对蛋白激酶p38 δ 的纳 米抗体， 此纳 米抗体具有 针对蛋白激酶p38δ独特的抗原互补决定区， 对蛋白激酶p38δ显示出了高度特异的结合活 性， 能够有效的抑制p38 δ 蛋白激酶的活性。 且不与p38MAPK的其他家族蛋白p38α、 p38β 和p38 δ 发生交叉反应。 [0005]本发明的第二目的在于提供编码所述的针对蛋白激酶p38 δ 的纳米抗体的核酸。 [0006]本发明的第三目的在于提供含有所述的针对蛋白激酶p38δ的纳米抗体 的核酸的说　明　书 1/6 页 3 CN 113637078 B 3