(19)国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202111010266.0 (22)申请日 2021.08.31 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 113616602 A (43)申请公布日 2021.11.09 (73)专利权人 中国药科大学 地址 211198 江苏省南京市江宁区龙眠大 道639号 (72)发明人 王伟　张子瑶　傅聪　 (74)专利代理 机构 南京苏高专利商标事务所 (普通合伙) 32204 专利代理师 柏尚春 (51)Int.Cl. A61K 9/16(2006.01) A61K 47/59(2017.01) A61K 47/60(2017.01) A61K 47/62(2017.01) A61K 47/69(2017.01) A61K 31/704(2006.01) A61K 31/4745(2006.01) A61P 35/00(2006.01)A61P 15/14(2006.01) B82Y 5/00(2011.01) B82Y 40/00(2011.01) (56)对比文件 WO 20202 24475 A1,2020.1 1.12 WO 2010083337 A2,2010.07.2 2 US 2009110739 A1,20 09.04.30 WO 20140 66912 A1,2014.0 5.01 CN 108837154 A,2018.1 1.20 WO 201819175 0 A2,2018.10.18 CN 103816122 A,2014.0 5.28 张洁蕾等.重组高密度脂蛋白载基因纳米粒 的制备及性质评价. 《中国新药杂志》 .2014,第23 卷(第6期), (续) 审查员 张玲玲 (54)发明名称 一种重组高密度脂蛋白-聚酰胺-胺纳米复 合物、 制法及应用 (57)摘要 本发明公开了一种重组高密度脂蛋白 ‑聚酰 胺‑胺纳米复合物， 所述纳米复合物核心是负载 免疫调节剂的重组 高密度脂蛋白纳米粒， 表面是 负载化疗药物的pH敏感修饰聚酰胺 ‑胺纳米粒； 该纳米复合物可响应酸性肿瘤微环境而释放表 面小粒径的载药聚酰胺 ‑胺纳米粒而渗透至肿瘤 深部， 且纳米复合物可以依 靠巨噬细胞清道夫受 体递送免疫调节剂改善肿瘤免疫环 境， 从而实现 肿瘤组织的高效渗透， 以及化疗与免疫治疗的联 合治疗； 本发明提供的重组高密度脂蛋白 ‑聚酰 胺‑胺复合物具有载体生物相容性好、 酸性肿瘤微环境响应性等特点， 可应用于癌症的靶向治 疗， 制备改善肿瘤免疫抑制环 境和抑制肿瘤生长 的药物。 [转续页] 权利要求书1页 说明书7页 附图5页 CN 113616602 B 2022.05.10 CN 113616602 B (56)对比文件 周欣等.RGD 肽修饰 重组高密度脂蛋白载药 纳米粒的制备和表征以及肿瘤细胞对其摄取作 用. 《药学进展》 .2014,第38卷(第1期), Kaichuang Ye等.Po lyethylene glyco l-modified dendrimer-entrap ped gold nanoparticles enhance CT ima ging of bl ood pool in atherosclerotic mice. 《Nan oscale Research Letters》 .2014,第9卷2/2 页 2[接上页] CN 113616602 B1.一种重组高密度脂蛋白 ‑聚酰胺‑胺纳米复合物， 其特征在于， 所述纳米复合物主要 由硬脂酰基磷脂酰乙醇胺 ‑聚乙二醇 （DPSE ‑PEG） 、 聚酰胺 ‑胺型树枝状高分子 （PAMAM） 、 阿霉 素、 磷脂、 胆固醇、 胆固醇酯、 载脂蛋白、 靶向肽、 硬脂酸和咪喹莫特 组成， 所述纳米复合物 为 核壳结构， 其核层为由磷脂、 胆固醇、 胆固醇酯、 载脂蛋白和咪喹莫特组成的负载咪喹莫特 的靶向重组高密度脂蛋白纳米粒， 磷脂层壳层为由阿霉素和DSPE ‑PEG‑PAMAM制得的负载阿 霉素的聚酰胺 ‑胺型树状纳米粒 （DPP/DOX） ， 所述靶向肽通过硬脂酸插入磷脂层的表面， 所 述靶向肽为C18 ‑M2pep， 序列为C18 ‑YEQDPWGVKWWY， 所述DSPE ‑PEG‑PAMAM是硬脂酰基磷脂酰 乙醇胺‑聚乙二醇 （DPSE ‑PEG） 修饰的聚酰胺 ‑胺型树枝状高分子 （PAMAM） ， 所述硬脂酰基磷 脂酰乙醇胺 ‑聚乙二醇为DPSE ‑PEG2000‑CHO， 所述聚酰胺 ‑胺型树枝状高分子为PAMAM ‑NH2， 所述DPSE‑PEG2000‑CHO和PAMAM ‑NH2的单体摩尔比为1:1.2~1:2。 2.根据权利要求1所述的纳米 复合物， 其特征在于， 所述DSPE ‑PEG2000‑CHO的末端为醛 基封端； 所述PAMAM为G4 ‑PAMAM， 其末端为氨基封端。 3.根据权利要求1所述的纳米复合物， 其特征在于， 所述重组高密度脂蛋白 ‑聚酰胺‑胺 纳米复合物的磷脂层壳层是将DSPE ‑PEG‑PAMAM通过疏水作用结合阿霉素， 形成聚酰胺 ‑胺 型树状纳米粒 （D PP/DOX） ， 所述核层与磷脂层壳层通过 疏水作用结合。 4.根据权利要求1所述的纳米复合物， 其特征在于， 所述磷脂为大豆卵磷脂、 蛋黄卵磷 脂、 二肉豆 蔻酰卵磷脂、 二棕榈酰卵磷脂或二硬脂酰卵磷脂； 所述胆固醇酯为胆固醇与脂肪 酸缩合成的胆固醇脂肪酸酯； 所述载脂蛋白为ApoA ‑Ⅰ。 5.权利要求1所述的重组高密度脂蛋白 ‑聚酰胺‑胺纳米复合物的制法， 其特征在于， 包 括以下步骤： （1） 制备负载阿霉素的聚酰胺 ‑胺型树状纳米粒： 将DPSE ‑PEG2000‑CHO和PAMAM ‑NH2添加 到DMSO 溶液中； 调节溶液为碱性， 冷冻干燥得到DSPE ‑PEG‑PAMAM （DPP） ； 滴加阿霉素的甲醇 溶液， 搅拌离心， 过 滤， 即得负载阿霉素的聚酰胺 ‑胺型树状纳米粒 （D PP/DOX） ； （2） 制备负载咪喹莫特的靶向重组高密度脂蛋白纳米粒rHDL/R837： 将磷脂、 胆固醇、 胆 固醇酯、 咪喹莫特溶解在有机溶剂中， 旋蒸， 加水搅拌， 超声分散， 加入载脂蛋白ApoA ‑Ⅰ孵 育， 过滤， 即得负载咪喹莫 特的靶向重组高密度脂蛋白纳米粒； （3） 制备重组高密度脂蛋白 ‑聚酰胺‑胺纳米复合物： 将负载咪喹莫特的靶向重组高密 度脂蛋白纳米粒和负载阿霉素的聚酰胺 ‑胺型树状纳米粒溶解在水中， 调节溶液pH为碱性， 搅拌孵育并加入 靶向肽， 即得 所述重组高密度脂蛋白 ‑聚酰胺‑胺纳米复合物。 6.根据权利要求5所述的制法， 其特征在于， 步骤 （1） 中， DPSE ‑PEG2000‑CHO和PAMAM ‑NH2 的质量比为10:3~10:4。 7.根据权利要求5所述的制 法， 其特征在于， 步骤 （1） 中， 所述阿霉素与DPP质量比为1: 10~8:10。 8.根据权利要求5所述的制法， 其特征在于， 步骤 （3） 中， 负载咪喹莫特的靶向重组高密 度脂蛋白纳米粒、 负载阿霉素的聚酰胺 ‑胺型树状纳米粒和靶向肽的质量比为50:15:1~50: 34:3。 9.权利要求1所述的重组高密度脂蛋白 ‑聚酰胺‑胺纳米复合物的应用， 其特征在于， 所 述纳米复合物在制备改善肿瘤免疫抑制环境和抑制肿瘤生长的药物的应用。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 113616602 B 3