(19)中华 人民共和国 国家知识产权局 (12)发明 专利 (10)授权公告 号 (45)授权公告日 (21)申请 号 202111014055.4 (22)申请日 2021.08.31 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 113717269 A (43)申请公布日 2021.11.30 (73)专利权人 赣江中药创新中心 地址 330000 江西省南昌市赣 江新区中 医 药科创城管委 会新祺周东大道8 88号 (72)发明人 梁鑫淼　叶贤龙　郭志谋　胡飞　 (74)专利代理 机构 南昌贤达专利代理事务所 (普通合伙) 36136 代理人 潘金凤 (51)Int.Cl. C07K 14/50(2006.01) C12N 15/12(2006.01)C12N 15/70(2006.01) C12N 1/21(2006.01) C07K 1/36(2006.01) C07K 1/34(2006.01) C07K 1/18(2006.01) A61K 38/18(2006.01) A61P 3/10(2006.01) A61P 3/04(2006.01) A61P 3/06(2006.01) A61P 1/16(2006.01) A61P 9/10(2006.01) A61P 35/00(2006.01) C12R 1/19(2006.01) 审查员 李颖 (54)发明名称 一种重组的变体FGF21蛋白及其制备方法和 应用 (57)摘要 本发明公开了一种重组人成纤维细胞生长 因子21类似物(mFGF21)及其制备方法。 将重组 mFGF21蛋白编码基因与表达载体连接得到重组 质粒后转化宿主细胞， 筛选阳性稳定表达工程菌 进行高密度发酵， 离心收集菌体进行高压匀浆破 碎， 经包涵体富集、 洗涤、 变性、 复性和缓冲液置 换工序， 并采用离子交换层析进行精纯和膜分离 技术的后处理， 获得电泳及液相纯度大于98％的 mFGF21蛋白。 本发明还公开了重组mFGF21蛋白在 治疗肥胖、 糖尿病、 高脂血症和非酒精性脂肪性 肝病等代谢疾病上的应用。 相较于野生型 hFGF21， 本发明mFGF21蛋白的稳定性和生物学活 性明显提高， 且在改善模型动物的血糖血脂水平 及脂肪肝上的效果更显著。 权利要求书1页 说明书8页 序列表2页 附图4页 CN 113717269 B 2022.04.19 CN 113717269 B 1.一种重组的变 体mFGF21蛋白， 其特 征在于， 其氨基酸序列： 如SEQ  ID NO: 2所示。 2.一种如权利 要求1所述的变体mFGF21蛋白的编码基因， 其特征在于， 其核苷酸序列如 序列表中SEQ  ID NO:1所示。 3.携带如权利要求2所述编码基因的载体或宿主细胞。 4.一种如权利 要求1所述的重组的变体mFGF21蛋白的制备方法， 其特征在于， 包括如下 步骤： 步骤一： 将合成的序列表中SEQ  ID NO:1的基因片段与原核表达载体连接， 转化大肠杆 菌， 获得表达 菌种； 步骤二： 培 养重组表达 菌种并诱 导其生产目标蛋白； 步骤三： 收获经步骤二处 理的表达 菌种， 对其分离纯化工序， 得到目标蛋白。 5.一种药物组合物， 其特征在于， 含有权利要求1所述mFGF21蛋白或采用权利要求4所 述的制备 方法制得的mFGF21蛋白。 6.根据权利要求5所述的一种药物组合物， 其特征在于， 还包括药学上可接受的载体、 赋形剂或稀释剂。 7.一种如权利要求5或6的药物组合物在制备预防或治疗代谢疾病药物中的应用， 其特 征在于， 所述代谢疾病包括糖尿病 、 肥胖症、 高脂血症和非 酒精性脂肪性 肝病。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 113717269 B 2一种重组的变体 FGF21蛋白及其制备方 法和应用 技术领域 [0001]本发明涉及生物医药技术领域， 具体讲是一种重组的变体FGF21蛋白及其制备方 法和应用。 背景技术 [0002]随着生活水平的不断提高， 以糖尿病(DM)和非酒精性脂肪肝病(NASH)为代表的代 谢类疾病成为威胁人类健康的隐形杀手。 我国胰岛素抵抗型糖尿病患者(T2D M)超过1亿 人， 发病后期会产生失明、 神经病变、 高血压、 肝肾脏病变和心血管疾病等并发症， 2025年全球 市场达到1200亿美金。 脂肪肝已经成为被严重低估的重大健康威胁， 患病人数已超过糖尿 病(T2DM 1亿)， 脂肪肝除了会引发肝脏严重病变乃至癌变之外， 还可能引发心血管及代谢 疾病， 或者加快发病进程。 国内约有近4.3亿的人群患有非酒精性脂肪肝， 全球患病率高达 25％， 超过17.5亿人， 2025年全球市场将达 到400亿美金。 [0003]DM疾病如果不能得到有效控制， 可引起体内多系统损害， 导致眼、 肾、 神 经、 心脏、 血管等组织的慢性进 行性病变， 引起功能缺陷乃至衰竭。 糖尿病因其并发症多、 致残率高的 特点已成为现阶段全世界需要着力应对的公共卫生问题。 目前临床上尚无治愈的方法， 患 者需要终身服药以维持血糖平稳。 同样， NASH疾病如不治疗后期造成肝纤维化和肝癌的风 险将明显增 加， 而在该疾病的治疗方面， 目前尚无相关药物批准上市。 [0004]成纤维细胞生长因子(FGF21)是成纤维细胞生长因子家族的一名新成员， 其氨基 酸序列与有FGF19亚家族成员之间具有较高的同源性。 大量 实验表明FGF21是体内又一个可 以独立调节血糖和血脂的调节因子， 体外能够促进3T3 ‑L1脂肪细胞消耗葡萄糖， 在体内具 有降低血糖水平、 降低甘油三酯、 升高高密度胆固醇脂蛋白、 降低低密度胆固醇脂蛋白等功 能， 并且不会产生低血糖、 高胰岛素血症、 体重增加及水肿等副作用。 随着 研究的进行， 研究 人员发现FGF ‑21不仅在糖脂代谢上具有重要的调节作用， 其功能还涉及改善胰岛β 细胞机 能， 延缓化学诱导的肝癌产生， 降低体重、 减少脂肪堆积等方面。 这些特征赋予了FGF21成为 治疗糖脂代谢异常的代谢综合征新药的必备条件， 作为安全可靠的代谢调节因子FGF21很 有潜力成为改善胰岛素抵抗的新型药物。 故FGF21在开发成治疗糖尿病、 肥胖、 非酒精性脂 肪肝等多种代谢疾病上具有重要的意义。 但临床试验发现FGF21在糖尿病患者中并没有显 著改善血糖的作用， 这可能与设计的FGF21突变体的生物学 活性和体内稳定性有关， 所以对 FGF21进行基因工程改造和化学修饰逐渐成为近年 来研究的热点。 发明内容 [0005]鉴此， 本发明通过计算机辅助预测及试验， 设计并构建了变体mFGF21蛋白， 通过优 化表达及纯化工艺制备了具有稳定性和生物学活性较好的mFGF21 蛋白。 动物实验结果显示 mFGF21蛋白在肥胖症、 糖尿病及NASH模型小鼠上表现了良好的功效， 且治疗效果显著优于 野生型FGF21(hFGF21)。 [0006]本发明的目的是提供一种新的变体mFGF21蛋白， 其氨基酸序列如SEQ  ID NO:2所说　明　书 1/8 页 3 CN 113717269 B 3