ICS65.020.99 CCSB16 JAASS T/JAASS68—2022团 体 标 准 草莓炭疽病菌检测技术规程 Codesofpracticefordetectionofstrawberryanthracnosepathogens 江苏省农学会  发布2022-10-21实施 2022-10-21发布 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/JAASS68—2022 I目次 前言........................................................................................................................................................................II 1范围...................................................................................................................................................................1 2规范性引用文件..............................................................................................................................................1 3术语和定义......................................................................................................................................................1 4实验室总体要求及工作人员操作要求..........................................................................................................1 5仪器设备与试剂..............................................................................................................................................1 6样品采集和贮运..............................................................................................................................................2 7样品制备..........................................................................................................................................................2 8分子生物学鉴定..............................................................................................................................................3 9结果判定..........................................................................................................................................................3 10样品保存与处理............................................................................................................................................3 11DNA及菌株保存与处理...............................................................................................................................3 12结果记录与保存............................................................................................................................................4 附录A（资料性）培养基的制备......................................................................................................................5 附录B（资料性）草莓炭疽病相关资料..........................................................................................................6 附录C（资料性）草莓炭疽病菌的培养性状和形态特征..............................................................................8 附录D（资料性）草莓植株或栽培介质样本炭疽病菌鉴定报告..................................................................9 全国团体标准信息平台 T/JAASS68—2022 II前言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本文件由江苏丘陵地区南京农业科学研究所提出。 本文件由江苏省农学会归口。 本文件起草单位：江苏丘陵地区南京农业科学研究所。 本文件主要起草人：唐冬兰、曹荣祥、蒋立奔、唐泉、张普娟、陈月红、郭成宝、须秋静、娄天成。 全国团体标准信息平台 T/JAASS68—2022 1草莓炭疽病菌检测技术规程 1范围 本文件规定了草莓炭疽病菌检测的试剂和材料、仪器和设备、操作步骤、结果判定、样品保存与处 理等。 本文件适用于草莓植株及其栽培介质中炭疽病菌的检测。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T19495.2—2004转基因产品检测实验室技术要求 GB/T6682—2008分析实验室用水规格和试验方法 GB/T27402—2008实验室质量控制规范植物检疫 SN/T2965—2011植物病原真菌分子生物学检测规范 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 目标DNA阳性对照positiveDNAtargetcontrol 从可溯源的标准物质提取的DNA或从含有目标序列的阳性样品中提取的DNA，用于证明测试样品 中的分析结果含有目标序列。 3.2 空白对照blankcontrol 无菌水溶液，用于证明检测试剂中不含有目标序列。 4实验室总体要求及工作人员操作要求 实验室总体要求及工作人员操作应符合GB/T27402—2008的要求。 5仪器设备与试剂 全国团体标准信息平台 T/JAASS68—2022 25.1仪器设备 PCR仪、凝胶成像系统、台式离心机、纯水仪、电泳仪、漩涡振荡器、超净工作台、生物培养箱、 高压灭菌锅、电子天平、冰箱（4℃、-20℃）、制冰机、接种器械灭菌器、多样品组织研磨仪。 培养皿、镊子、手术剪、手术刀、移液器、带滤芯吸头（10μL、200μL和1000μL）、滤纸、离心 管（100μL、1.5mL、10mL和50mL）、钢珠、封口膜。 5.2主要试剂 葡萄糖、琼脂、氨苄青霉素、链霉素、次氯酸钠、70%乙醇、DNA聚合酶、引物、无毒核酸染料、 裂解缓冲液、真菌DNA提取试剂盒。 马铃薯葡萄糖培养基（PDA）的制备参见附录A。 本文件所有试剂均为分析纯，实验用水应符合GB/T6682-2008的规定。 6样品采集和贮运 对草莓植株进行取样时，各个部位包括叶片、叶柄、根茎、匍匐茎和果实等均可用于检测，采样前 观察待检植株有无病症或其它生长不良情况，并进行拍照及记录。栽培介质样品通常取与植株根系结合 紧密的土壤或基质5g～10g。 取样工具提前采用121±2℃（1.1×105Pa）高压灭菌的方式进行消毒处理。取样过程中佩戴一次性 手套，每取1个样品后，用75%乙醇对取样工具进行擦拭消毒，每份样品单独置于一次性自封袋中