行业文档 SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T2497.7—2010 进出口危险化学品安全试验方法 第7部分：小鼠耳肿胀试验 Test method of import and export dangerous chemicals- Part 7 : Mice ear swelling 2010-03-02发布 2010-09-16实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T2497.7—2010 前言 SN/T2497《进出口危险化学品安全试验方法》系列标准共分为29部分： 第1部分：体内哺乳动物肝细胞程序外DNA合成（UDS)试验； 第2部分：空斑形成细胞（PFC)试验； 第3部分：大型涵繁殖试验； 第4部分：酿酒酵母有丝分裂重组试验； 第5部分：睾丸细胞UDS试验； 第6部分：哺乳类动物细胞姐妹染色单体互换体外试验； 第7部分：小鼠耳肿胀试验； 第8部分：胆窝淋巴结试验； 第9部分：血清溶血素测定试验； 第10部分：T淋巴细胞增殖功能测定试验； 第11部分：种系突变试验； 第12部分：单细胞凝胶电泳分析试验； 第13部分：荧光原位杂交试验； 第14部分：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳试验； 第15部分：PCR-SSCP实验； 第16部分：Western-Blot实验； 第17部分：哺乳动物行为毒理学试验； 第18部分：DNA加合物的检测方法； 第19部分：NorthernBlot实验； 第20部分：Bradford法测定蛋白质含量； 第21部分：琼脂糖凝胶电泳试验； 第22部分：DNA的Tm值测定方法； 第23部分：细胞器的分离实验方法； 第24部分：细胞免疫功能体外检测方法； 第25部分：体液免疫功能试验； 第26部分：巨噬细胞功能试验； 第27部分：流式细胞术检测凋亡； 第28部分：穿梭质粒在突变检验中的应用； 第29部分：生化需氧量（BOD)测定。 本部分为SN/T2497的第7部分。 本部分修改采用《毒理学实验方法与技术》中的免疫毒理学研究方法，其有关技术内容与上述方法 完全一致，在标准文本格式上按GB/T1.1一2000做了编辑性修改。 本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本部分负责起草单位：中华人民共和国天津出人境检验检疫局、中华人民共和国湖南出人境检验检 疫局。 本部分主要起草人：李宁涛、王利兵、于艳军、陈庆俊、徐斌、李学洋。 本部分系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 I SN/T2497.7—2010 进出口危险化学品安全试验方法 第7部分：小鼠耳肿胀试验 1范围 SN/T2497的本部分规定了进出口危险化学品安全试验中小鼠耳肿胀试验的术语和定义、试验原 理、试验方法和试验结果。 本部分适用于进出口危险化学品安全试验中的小鼠耳肿胀试验。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过SN/T2497的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文 协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本 部分。 GB14924.1实验动物 配合饲料通用质量标准 3试验原理 二硝基氟苯是一种半抗原，将其稀释液涂抹小鼠腹部皮肤后，与皮肤蛋白结合成完全抗原，刺激T 细胞增殖成致敏淋巴细胞。（4～7)d后再将其涂抹于小鼠耳部皮肤，使局部产生迟发型超敏反应，于抗 原攻击后（24～28)h，测定耳部肿胀度，以反应迟发型皮肤超敏反应的强度。 4试验方法 4.1试验动物 选取（6～8）周龄小鼠，试验前，实验动物富含维生素A的饲料喂养4周。实验动物和动物试验的 环境设施符合GB14924.1的相关规定。 4.2试剂和耗材 4.2.1阳性对照：二硝基氟苯溶液。 4.2.2注射器、天平、胶布、打孔器。 4.3剂量和分组 取体重（18～22）g小鼠50只，随机分为5组，每组10只，雌雄各半。分别设阴性对照组、阳性对照 组及染毒组（低、中、高剂量组）。阳性对照组用二硝基氟苯（DNFB）。 4.4试验步骤 4.4.1二硝基氟苯溶液配制 1%的DNFB溶液应新鲜配制，称取DNFB5Omg，置于清洁干燥的青霉素小瓶中，将预先配制好的 5mL丙酮麻油溶液倒入小瓶，盖好并用胶布密封，混匀后，用250μL注射器通过瓶盖取用。 4.4.2致敏 试验前24h于小鼠背部，用剃须刀进行脱毛。试验第1天和第2天在小鼠背部脱毛区涂抹待检化 学物100L。第6天将40L受试物敷在小鼠左耳，右耳敷溶剂。激发后24h和48h，颈椎脱白处死 小鼠，剪下左右耳壳，用打孔器取下直径8mm的耳片，称重。以左右耳重量之差为肿胀度 1 SN/T2497.7—2010 5 试验结果 试验结果可以用双侧耳朵厚度的差值（mm)来表示或用耳肿胀程度（%）来表示。 耳肿胀（%）=（实验耳厚度/对照耳厚度）×100%。 2 SN/T 2497.7—2010 中华人民共和国出入境检验检疫 行业标准 进出口危险化学品安全试验方法 第7部分：小鼠耳肿胀试验 SN/T2497.7—2010 * 中国标准出版社出版 北京复兴门外三里河北街16号 邮政编码：100045 网址www.spc.net.cn 电话：68523946 68517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷 * 开本880×1230 1/16 印张0.5 字数5千字 2010年5月第一版 2010年5月第一次印刷 印数1-1600 * SN/T2497.7-2010 书号：155066·2-20927 定价14.00元 SN/T 2497.7—2010 中华人民共和国出入境检验检疫 行业标准 进出口危险化学品安全试验方法 第7部分：小鼠耳肿胀试验 SN/T2497.7—2010 * 中国标准出版社出版 北京复兴门外三里河北街16号 邮政编码：100045 网址www.spc.net.cn 电话：68523946 68517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷 * 开本880×1230 1/16 印张0.5 字数5千字 2010年5月第一版 2010年5月第一次印刷 印数1-1600 * SN/T2497.7-2010 书号：155066·2-20927 定价14.00元