行业文档 SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T2497.10—2010 进出口危险化学品安全试验方法 第10部分：T淋巴细胞增殖功能测定试验 Test method of import and export dangerous chemicals- Part 1O:Determination of T lymphocyte proliferation function 2010-03-02发布 2010-09-16实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T2497.10—2010 前言 SN/T2497《进出口危险化学品安全试验方法》系列标准共分为29部分： 第1部分：体内哺乳动物肝细胞程序外DNA合成（UDS)试验； 第2部分：空斑形成细胞（PFC)试验； 第3部分：大型涵繁殖试验； 第4部分：酿酒酵母有丝分裂重组试验； 第5部分：睾丸细胞UDS试验； 第6部分：哺乳类动物细胞姐妹染色单体互换体外试验； 第7部分：小鼠耳肿胀试验； 第8部分：窝淋巴结试验； 第9部分：血清溶血素测定试验； 第10部分：T淋巴细胞增殖功能测定试验； 第11部分：种系突变试验； 第12部分：单细胞凝胶电泳分析试验； 第13部分：荧光原位杂交试验； 第14部分：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳试验； 第15部分：PCR-SSCP实验； 第16部分：Western-Blot实验； 第17部分：哺乳动物行为毒理学试验； 第18部分：DNA加合物的检测方法； 第19部分：NorthernBlot实验； 第20部分：Bradford法测定蛋白质含量； 第21部分：琼脂糖凝胶电泳试验； 第22部分：DNA的Tm值测定方法； 第23部分：细胞器的分离实验方法； 第24部分：细胞免疫功能体外检测方法； 第25部分：体液免疫功能试验； 第26部分：巨噬细胞功能试验； 第27部分：流式细胞术检测凋亡； 第28部分：穿梭质粒在突变检验中的应用； 第29部分：生化需氧量（BOD)测定。 本部分为SN/T2497系列标准的第10部分。 本部分修改采用《毒理学实验方法与技术》中的免疫毒理学研究方法，其有关技术内容与上述方法 完全一致，在标准文本格式上按GB/T1.1一2000做了编辑性修改。 本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本部分负责起草单位：中华人民共和国天津出人境检验检疫局、中华人民共和国湖南出人境检验检 疫局。 本部分主要起草人：贾晓川、王利兵、张园、熊中强、李学洋、徐斌。 本部分系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 I SN/T2497.10—2010 进出口危险化学品安全试验方法 第10部分：T淋巴细胞增殖功能测定试验 1范围 SN/T2497的本部分规定了T淋巴细胞增殖功能测定试验的术语和定义、试验原理、试验方法和 试验结果。 本部分适用于进出口危险化学品对T淋巴细胞增殖功能的影响测定试验。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过SN/T2497的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的文件，其 随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的 各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的文件，其最新版本适用于本部分。 GB14924.1实验动物配合饲料通用质量标准 GB14925实验动物环境及实施 3术语、定义和缩略语 3.1术语和定义 下列术语和定义适用于本部分。 3. 1. 1 T淋巴细胞 Tlymphocyte T淋巴细胞的前体在骨髓，然后迁移至胸腺并在胸腺成熟，即胸腺来源淋巴细胞，在机体中发挥细 胞免疫和免疫调节等功能。 3.2缩略语 下列缩略语适用于本部分。 3.2.1 MTT 噻唑蓝3-（4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐 4试验原理 T细胞在体外培养时，受到有丝分裂原（如刀豆蛋白A)刺激后，可出现细胞体积增大，代谢旺盛，蛋 白和核酸合成增加，即向淋巴母细胞转化和增殖。淋巴细胞转化率的高低可以反映机体的细胞免疫水 平，因此可作为测定机体免疫功能的指标之一。 MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢 亚砜能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数 量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。 5试验方法 5.1i 试验动物 小鼠或大鼠，根据试验需要选择不同体重动物。试验动物饲养条件应符合GB14924.1和 GB14925有关规定。 1 SN/T2497.10—2010 5. 2 试剂和材料 除另有规定外，所有试剂均为分析纯，实验用水为灭菌蒸馏水或超纯水。 细胞培养基、小牛血清、刀豆蛋白A、MTT（5μg/mL）、二甲基亚砜。 5. 3 3主要仪器设备 超净工作台、CO2培养箱、酶联免疫监测仪， 5.4试验步骤 5.4.1细胞悬液制备 液，按（1～2）×105个/100μL的浓度加人96孔培养板，每组至少3复孔。 5.4.2对照组 应设立一组不加刺激剂的阴性对照组。 5.4.3加入刺激剂 按照终浓度为5μg/mL加人刀豆蛋白A，使每孔液体总量为200μL。 5.4.4培养条件 37℃、5%CO2孵育66h。 5.4.5 5检测 每孔加20uLMTT，继续孵育4h，弃去孔内液体，每孔加入150μL二甲基亚砜，用酶联免疫检 测仪在490nm波长检测吸光度OD值，结果取每组平均值 试验结果 9 用刺激指数SI表示，见式（1）： OD实验组×100% SI = OD阴性对照组 2 SN/T 2497.10—2010 中华人民共和国出入境检验检疫 行业标准 进出口危险化学品安全试验方法 第10部分：T淋巴细胞增殖功能测定试验 SN/T2497.10—2010 * 中国标准出版社出版 北京复兴门外三里河北街16号 邮政编码：100045 网址www.spc.net.cn 电话：68523946 68517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷 * 开本880×1230 1/16 印张0.5 字数6千字 2010年6月第一版 2010年6月第一次印刷 印数1-1600 * SN/T2497.10-2010 书号：155066·2-20943 定价14.00元 SN/T 2497.10—2010 中华人民共和国出入境检验检疫 行业标准 进出口危险化学品安全试验方法 第10部分：T淋巴细胞增殖功能测定试验 SN/T2497.10—2010 * 中国标准出版社出版 北京复兴门外三里河北街16号 邮政编码：100045 网址www.spc.net.cn 电话：68523946 68517548 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷 * 开本880×1230 1/16 印张0.5 字数6千字 2010年6月第一版 2010年6月第一次印刷 印数1-1600 * SN/T2497.10-2010 书号：155066·2-20943 定价14.00元