ICS 71.040.40 SN G 04 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 2497.32019 代替SN/T2497.3—2010 进出口危险化学品安全试验方法 第3部分：大型泽繁殖试验 Method for the test of import and export dangerous chemicals- Part 3:Daphnia magna reproduction test 2019-10-25发布 2020-05-01实施 G955550017076 中华人民共和国海关总署 发布 刮开签层激活害列 SN/T2497.3—2019 前 創言 SN/T2497--2019《进出口危险化学品安全试验方法》分为29个部分： 第1部分：体内哺乳动物肝细胞程序外DNA合成（UDS)试验； 第2部分：空斑形成细胞（PFC)试验； 第3部分：大型繁殖试验； 第4部分：酿酒酵母有丝分裂重组试验； 第5部分：睾丸细胞（UDS)试验； 第6部分：哺乳类动物细胞姐妹染色单体互换体外试验； 第7部分：小鼠耳肿胀试验； 第8部分：胭窝淋巴结试验； 第9部分：血清溶血素测定试验； -第10部分：T淋巴细胞增殖功能测定试验； 第11部分：种系突变试验； 第12部分：单细胞凝胶电泳分析试验； 第13部分：荧光原位杂交试验； 第14部分：SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳试验； 第15部分：PCR-SSCP实验； 第16部分：Western-Blot实验； 第17部分：哺乳动物行为毒理学试验； 第18部分：DNA加合物的检测方法； 第19部分：NorthernBlot实验； 第20部分：Bradford法测定蛋白质含量； 第21部分：琼脂糖凝胶电泳试验； 第22部分：DNA的Tm值测定方法； 第23部分：细胞器的分离实验方法； 第24部分：细胞免疫功能体外检测方法； 第25部分：体液免疫功能试验； 第26部分：巨噬细胞功能试验； 第27部分：流式细胞术检测凋亡； 第28部分：穿梭质粒在突变检验中的应用； 第29部分：生化需氧量（BOD)测定。 本部分为SN/T2497—2019的第3部分。 本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本部分等同采用经济合作与发展组织（OECD)化学品测试指南NO.211(2012)《大型潘繁殖试验》 （英文版），其有关技术内容与上述方法完全致，在标准文本格式上按GB/T1.1一2009做了编辑性 修改。 本部分代替SN/T2497.3一2010《进出口危险化学品安全试验方法第3部分：大型繁殖试验》。 本部分与SN/T2497.3--2010相比，主要技术变化如下： 增加了部分术语和定义； I SN/T 2497.3—2019 更改了试验结果的内容； 更正了附录E中雌、雄幼遥形态的辨别。 本部分由中华人民共和国海关总署提出并归口， 本标准起草单位：中华人民共和国天津海关。 本标准主要起草人：赵琢、翟自芹、张园、柳明、王华、刘伟。 本部分所代替标准的历次版本发布情况为： SN2497.3—2010。 SN/T2497.3-2019 进出口危险化学品安全试验方法 第3部分：大型繁殖试验 范围 SN/T2497--2019的本部分规定了进出口危险化学品大型泽繁殖试验的试验代器、试验程序、试 验质量控制和试验结果。 本部分适用于进出口危险化学品慢性水生毒性的测定。 2术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2. 1 亲涵 parent animals 试验开始时用于繁殖的雌涵。 2. 2 幼泽 offspring 试验期间亲潘所产的小泽。 2. 3 繁殖量 reproductiveoutput 试验期间亲泽所产成活幼遥的数量。 2. 4 意外死亡accidentalmortality 因意外导致的，与受试物无关的死亡，即已知原因的死亡。 2. 5 偶尔死亡inadvertentmortality 未知原因的，与受试物无关的死亡。 2.6 最低可观察效应浓度 lowestobservedeffectconcentration;LOEC 与对照组相比，对受试生物产生显著效应(P<0.05)的最低受试物浓度。 2.7 无可观察效应浓度 noobservedeffectconcentration;NOEC 与对照组相比，对受试生物未产生显著效应(P<0.05)的最高受试物浓度。 2.8 效应浓度 ECx 引起受试生物繁殖量降低x%时的受试物浓度。 2. 9 内票增长率 intrinsic rate of population increase 综合繁殖量与特定种龄死亡率测定种群增长能力的参数。稳定状态的种群，内增长率为零。增 长的种群，内增长率为正，衰退的种群，内增长率为负。 1 SN/T2497.3—2019 2. 10 检出限 limit of detection 可以检出但不能定量的最低浓度。 2. 11 检测限 limitofdetermination 可定量测定的最低浓度。 2. 12 死亡 mortality 动物不能游动，或轻晃试验容器，15s内，没有观察到附肢或后腹部活动，为动物死亡。 3试验原理 在大型谨繁殖期间，测定受试物对大型死亡率和繁殖的影响。大型遥在含有不同浓度的受试物 溶液中暴露21d，通过对暴露在受试物中的亲遥繁殖量与对照组比较，确定最低可观察效应浓度和无可 观察效应浓度，以及效应浓度。受试物的繁殖毒性效应用ECx或者NOEC/LOEC值表示，通过数据与 适当的模型拟合和非线性回归来估计ECx。测试浓度组应该包括最低的效应浓度（如EC1。）。 4试验仪器 4.1试验容器和其他与试验液接触的器血应为全玻璃制品，或由其他化学情性材料制成。试验容器通 常为玻璃烧杯。 4.2溶氧仪。 4.3温度控制仪。 4.4 pH计。 4.5水硬度测定仪。 4.6水中总有机碳(TOC)测定仪或化学需氧量(COD)测定仪。 4.7控制光照周期与测定光强度的仪器。 5试验程序 5.1受试生物 所用物种为大型遥（Daphniamagna）： 试验所用应满足亲遥所产幼潼的平均值≥60只； 一试验开始时，龄不能超过24h且不能使用第一批子代； 一试验用涵应来自同一健康的储备群体，应无以下反常现象，如高死亡率、出现雄或冬卵、第一 批幼遥产期延迟、体色异常等现象。 储备群体的培养条件（光照、温度、培养基、喂食、单位体积中的遥数)须与试验相近。 如果试验所用培养基与常规培养不同，应有一个为期3周（即一代）的供试前驯养期。 5.2试验分组 5.2.1剂量组 5.2.1.1 利用受试物的其他毒性资料，选择试验剂量组。 2 SN/T 2497.3—2019 5.2.1.2至少设置5个剂量组，按几何级数排列，间距系数不超过3.2，每一剂量组应设置适当的平行 组。试验剂量组最高不超过受试物在试验液中的溶解度。 5.2.1.3在剂量组设置时，应注意： 如果要估计影响繁殖的ECx，应用足够的剂量组来确定ECx及其恰当的置信限。如果估算影 响繁殖的ECso，最高试验剂量组应大于ECso。 量应明显低于对照组。 -根据受试物对其他生物无毒和/低吸收/不吸收推测出受试物很可能是低毒/无毒时，繁殖试验 可以设置1个剂量组（如10mg/L)和1个对照组进行限度试验，剂量组和对照组应分别设置 10个平行。若流水式试验中需要进行限度试验，平行可以减少。 对成龄的存活率在统计上有显著影响的浓度不能包括在试验剂量组范围内。 -如果使用助溶剂或分散剂配制试验液，其在试验容器中浓度不能大于.0.1mL/L，并在所有试 - 验容器中应一致。 5.2.2对照组 5.2.2.1应设置试验培养基对照，若使用助溶剂或分散剂，应设置助溶剂或分散剂的对照。所用助溶 剂或分散剂的浓度应与剂量组的一致。 5.2.2.2试验中，对照组每只亲遥所产成活幼涵的平均数的变异系数应小于等于25%。 5.3试验准备 5.3.1试验用水 5.3.1.1试验中应使用规定的培养基，如ElendtM4和M7（参见附录A）。 5.3.1.2如果培养基中含有未规定的添加剂，应明确注明，并在试验报告中给出相应资料。应测定含 有有机附加物的贮备液中总有机碳（TOC)和化学需氧量（COD)，供估算试验培养基中所提供的TOC/ COD量。 5.3.1.3当受试物含有金属时，不应使用M4和M7培养基以及其他含有螯合剂的培养基。可采用替 代的培养基，如加有海藻提取物的ASTM新鲜重组水。 5.3.1.4试验开始与试验期间，溶解氧浓度应大于3mg/L。pH值应在6～9的范围内。正常情况下， 任一试验中pH值的变化不应大于1.5个单位。 5.3.2试验液 5.3.2.1选定浓度的试验液通常用稀释贮备液的方法配制。 5.3.2.2在一些情况下为了配制合适浓度的贮备液，允许但应尽量避免使用有机溶剂或分散剂。可用 的有机溶剂有丙酮、乙醇、甲醇、二甲基甲酰胺和三甘醇。可用的分散剂有聚氧乙烯化脂肪酸甘油酯、 0.01%的甲基纤维素甲醚和聚氧乙烯化氢化麻油。 5.4试验步骤 5.4.1试验条件 5.4.1.1试验周期为21d。 5.4.1.2负荷： 一亲应分开培养，每个容器一只，容器中培养基体积为50mL～100mL。 一基于满足测定受试物剂量组的化学分析的要求，允许增加培养基体积；若所用体积大于 3 SN/T2497.3—2019 100mL，应增加的喂食量以确保有足够的食物； 对于流水式试验，考虑技术原因，可变动设计，如分成4个平行，每组10只在一个较大的试验 容器中，应记录试验设计的任何变化。 5.4.1.3试验生物： 对于半静态试验，每一