ICS65.100 B13 中华人民共和国国家标准 GB/T31270.7—2014 化 化学农药环境安全评价试验准则 第7部分:生物富集试验 Testguidelinesonenvironmentalsafetyassessmentforchemical pesticides—Part7:Bioconcentrationtest 2014-10-10发布 2015-03-11实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会发布前 言 GB/T31270《化学农药环境安全评价试验准则》分为21个部分: ———第1部分:土壤降解试验; ———第2部分:水解试验; ———第3部分:光解试验; ———第4部分:土壤吸附/解吸试验; ———第5部分:土壤淋溶试验; ———第6部分:挥发性试验; ———第7部分:生物富集试验; ———第8部分:水-沉积物系统降解试验; ———第9部分:鸟类急性毒性试验; ———第10部分:蜜蜂急性毒性试验; ———第11部分:家蚕急性毒性试验; ———第12部分:鱼类急性毒性试验; ———第13部分:溞类急性活动抑制试验; ———第14部分:藻类生长抑制试验; ———第15部分:蚯蚓急性毒性试验; ———第16部分:土壤微生物毒性试验; ———第17部分:天敌赤眼蜂急性毒性试验; ———第18部分:天敌两栖类急性毒性试验; ———第19部分:非靶标植物影响试验; ———第20部分:家畜短期饲喂毒性试验; ———第21部分:大型甲壳类生物毒性试验。 本部分是GB/T31270的第7部分。 本部分按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本部分由中华人民共和国农业部提出并归口。 本部分负责起草单位:农业部农药检定所、环保部南京环境科学研究所。 本部分主要起草人:单正军、林荣华、孔祥吉、王娜、李莹、吴珉、张宏涛。 ⅠGB/T31270.7—2014 化学农药环境安全评价试验准则 第7部分:生物富集试验 1 范围 GB/T31270的本部分规定了生物富集试验的材料、条件、操作、质量控制、数据处理、试验报告等 的基本要求。 本部分适用于化学农药登记而进行的生物富集试验,仅当供试物LogKow>3时才进行该项试验。 其他类型的农药可参照使用。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2.1 生物富集 bioconcentration 生物体从生活环境与食物中不断吸收低剂量物质、逐渐在体内积累浓缩的过程。 同义词:生物浓缩、生物蓄积bioaccumulation。 [NY/T1667.5—2008,定义3.5] 2.2 供试物 testsubstance 试验中需要测试的物质。 2.3 化学农药 chemicalpesticide 利用化学物质人工合成的农药。其中有些以天然产品中的活性物质为母体,进行仿制、结构改造, 创新而成,为仿生合成农药。 同义词:有机合成农药syntheticorganicpesticide。 [NY/T1667.1—2008,定义2.3.1] 2.4 原药 technicalmaterial 在制造过程中得到的有效成分及杂质组成的最终产品,不能含有可见的外来物质和任何添加物,必 要时可加入少量的稳定剂。 [NY/T1667.2—2008,定义2.5.1] 2.5 有效成分 activeingredient;a.i. 农药产品中具有生物活性的特定化学结构成分。 [NY/T1667.2—2008,定义3.1] 2.6 半静态试验法 semi-statictest 试验期间每隔一定时间(如24h)更换一次药液,保持试验药液的浓度不低于初始浓度的80%。 1GB/T31270.7—2014 2.7 静态试验法 statictest 试验期间不更换试验药液。 2.8 流水式试验法 flow-throughtest 试验期间药液自动连续地流入试验容器,同时保持容器内药液体积的相对恒定。 3 试验概述 采用鱼类作为供试生物,按供试物的性质采用静态法、半静态法或流水式试验法。将受试鱼暴露于 两个浓度的供试物溶液中,定期采样测定鱼体与药液中供试物的浓度,计算得生物富集系数(BCF),以 此评价供试物的生物富集性。根据农药登记管理法规及其他规定选择相关方法进行试验。 4 试验方法 4.1 材料和条件 4.1.1 供试物 供试物应使用农药纯品、原药或制剂。 4.1.2 供试生物 试验用鱼种宜选择的斑马鱼(Brachydoniorerio)、鲤鱼(Cyprinuscarpio)、虹鳟鱼(Oncorhynchus mykiss)、青鳉(Oryziaslatipes)或稀有鮈鲫(Gobiocyprisrarus)幼鱼,具体体长和水温条件等驯养要 求参见附录A。如选用其他鱼类作为供试生物,应采用相应的驯养和试验条件,并加以说明。 试验用鱼应健康无病,大小一致。试验前应在与试验时相同的环境条件下驯养7d~14d,驯养期 间每天喂食1次~2次,每日光照12h~16h,及时清除粪便及食物残渣。试验期间在必要时投入适量 饵料(每天投喂量约为鱼体重的1%~2%),每天用虹吸管及时清除试验鱼缸中剩余的饵料和排泄物。 4.1.3 主要仪器设备 主要仪器设备如下: ———鱼缸; ———气相色谱仪/液相色谱仪等。 4.1.4 试验用水 试验用水为存放并去氯处理24h以上的自来水(必要时经活性炭处理)或能注明配方的稀释水。 水质硬度在10mg/L~250mg/L之间(以CaCO3计),pH在6.0~8.5之间,并且试验期间变化量在 ±0.5之间,溶解氧保持在试验温度下饱和值的60%。 4.2 试验操作 4.2.1 供试物溶液配制 将供试物溶于水中,难溶于水的可用少量低毒、不易降解的有机溶剂(如叔丁醇或二甲亚砜)助溶, 加量小于0.1mL/L。 2GB/T31270.7—2014 4.2.2 方法的选择 按供试物的稳定性选择静态试验法、半静态试验法或流水式试验法。对于稳定性较强的供试物采 用静态试验法;对具有一定稳定性的供试物,如供试物水溶液在24h内浓度变化小于20%,采用半静态 试验法;对易降解与强挥发性的供试物,采用流水式试验法。方法选择详见附录B。 4.2.3 正式试验 应先做鱼类急性毒性试验,求得LC50(96h)值,再进行生物富集试验。配制药液浓度通常为急性 毒性LC50(96h)的1/10和1/100两个处理,每个处理至少应设两个平行。每个处理投放一定数量的试 验用鱼,投放数量应满足试验分析的需要,并使生物承载量满足每天每升水承载鱼重(湿重)0.1g~ 1.0g。试验过程中定期测定水中pH、溶解氧含量,于0h、24h、48h、96h、144h、192h分别从各处理 中取水样与鱼样(称重,采集鱼尾数应满足试验分析的需要,采用虹吸法采集水样),测定水样与鱼样中 的供试物含量。同时设置不加供试物的对照处理。 4.3 数据处理 检测鱼体摄入供试物的实际值。试验结束时水体及鱼体中供试物含量变化已达到平衡,则鱼体对 供试物的富集系数按式(1)计算,计算结果保留三位有效数字。 BCF=Cfs Cws……………………(1) 式中: BCF———生物富集系数; Cfs———平衡时鱼体内的供试物含量,单位为毫克每千克(mg/kg); Cws———平衡时水体中的供试物含量,单位为毫克每升(mg/L)。 如果在试验结束时,鱼体中农药浓度尚未达到平衡,则用上述公式求出的富集系数值应注明是8d 的结果,即用BCF8d表示。 4.4 质量控制 质量控制条件包括: ———试验前试验用鱼应在实验室内预养一周,预养期间生长正常,死亡率小于5%; ———水和鱼体中农药残留量测定方法回收率为70%~110%,最低检测浓度限应低于初始添加浓 度的1%; ———试验期间水中溶解氧保持试验温度下饱和值的60%; ———试验期间试验鱼生长正常; ———试验浓度设定以满足试验要求为标准。 5 试验报告 试验报告至少应包括下列内容: ———供试物的信息,包括供试农药的通用名、化学名称、结构式、CAS号、纯度、基本理化性质、来 源等; ———供试生物的种名、来源、驯化时间、驯化条件、食物种类与数量、鱼龄和规格; ———试验条件,包括试验时间、周期、温度、试验容器、农药浓度、pH、溶解氧、助溶剂及浓度、试验鱼 数量、投食时间和数量等; 3GB/T31270.7—2014 ———水和鱼体中农药残留量分析方法,包括样品提取、测定条件、线性范围、添加回收率、相对标准 偏差、最小检测量; ———试验结果,包括试验期间鱼死亡率、异常反应、表征变化;富集系数对时间的曲线、生物富集系 数等; ———生物富集性划分参见附录C。 4GB/T31270.7—2014 附 录 A (资料性附录) 试验用鱼的选择 适合生物富集试验的鱼种及适宜水温条件见表A.1。 表A.1 试验用鱼的体长和适宜水温 鱼种 体长 适宜水温 斑马鱼 (2.0±1.0)cm 21℃~25℃ 虹鳟鱼 (5.0±1.0)cm 13℃~17℃ 青鳉 (2.0±1.0)cm 21℃~25℃ 鲤鱼 (3.0±1.0)cm 20℃~24℃ 稀有鮈鲫 (2.0±1.0)cm 21℃~25℃ 5GB/T31270.7—2014 附 录 B (规范性附录) 试验方法的选择 静态、半静态、动态法的选择要点见表B.1。 表B.1 试验方法的选择及操作要点 试验项目 试验方法 适用范围 操作说明 生物富集性静态法稳定农药(水解/挥发率≤10%)试验期间