ICS65.100 B13 中华人民共和国国家标准 GB/T31270.18—2014 化 化学农药环境安全评价试验准则 第18部分:天敌两栖类急性毒性试验 Testguidelinesonenvironmentalsafetyassessmentforchemicalpesticides— Part18:Amphibianacutetoxicitytest 2014-10-10发布 2015-03-11实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会发布前 言 GB/T31270《化学农药环境安全评价试验准则》分为21个部分: ———第1部分:土壤降解试验; ———第2部分:水解试验; ———第3部分:光解试验; ———第4部分:土壤吸附/解吸试验; ———第5部分:土壤淋溶试验; ———第6部分:挥发性试验; ———第7部分:生物富集试验; ———第8部分:水-沉积物系统降解试验; ———第9部分:鸟类急性毒性试验; ———第10部分:蜜蜂急性毒性试验; ———第11部分:家蚕急性毒性试验; ———第12部分:鱼类急性毒性试验; ———第13部分:溞类急性活动抑制试验; ———第14部分:藻类生长抑制试验; ———第15部分:蚯蚓急性毒性试验; ———第16部分:土壤微生物毒性试验; ———第17部分:天敌赤眼蜂急性毒性试验; ———第18部分:天敌两栖类急性毒性试验; ———第19部分:非靶标植物影响试验; ———第20部分:家畜短期饲喂毒性试验; ———第21部分:大型甲壳类生物毒性试验。 本部分是GB/T31270的第18部分。 本部分按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本部分由中华人民共和国农业部提出并归口。 本部分负责起草单位:农业部农药检定所、环保部南京环境科学研究所。 本部分主要起草人:周军英、曲甍甍、单正军、田丰、俞瑞鲜、郝身伟、陈朗。 ⅠGB/T31270.18—2014 化学农药环境安全评价试验准则 第18部分:天敌两栖类急性毒性试验 1 范围 GB/T31270的本部分规定了天敌两栖类急性毒性试验的材料、条件、操作、质量控制、数据处理、 试验报告等的基本要求。 本部分适用于为化学农药登记而进行的天敌两栖类急性毒性试验,其他类型的农药可参照使用。 本部分不适用于易挥发和难溶解的化学农药。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2.1 半致死浓度 medianlethalconcentration 在急性毒性试验中,引起50%的供试生物死亡时的供试物浓度,用LC50表示。 注:单位为mga.i./L。 2.2 供试物 testsubstance 试验中需要测试的物质。 2.3 化学农药 chemicalpesticide 利用化学物质人工合成的农药。其中有些以天然产品中的活性物质为母体,进行仿制、结构改造, 创新而成,为仿生合成农药。 同义词:有机合成农药syntheticorganicpesticide。 [NY/T1667.1—2008,定义2.3.1] 2.4 原药 technicalmaterial 在制造过程中得到的有效成分及杂质组成的最终产品,不能含有可见的外来物质和任何添加物,必 要时可加入少量的稳定剂。 [NY/T1667.2—2008,定义2.5.1] 2.5 制剂 formulationproduct 由农药原药(或母药)和助剂制成使用状态稳定的产品。 [NY/T1667.2—2008,定义2.4] 2.6 半静态试验法 semi-statictest 试验期间每隔一定时间(如24h)更换一次药液,以保持试验药液的浓度不低于初始浓度的80%。 1GB/T31270.18—2014 2.7 静态试验法 statictest 试验期间不更换试验药液。 2.8 流水式试验法 flow-throughtest 试验期间药液连续更新。 3 试验概述 天敌两栖类急性毒性测定方法有静态法、半静态法与流水式试验法三种。应根据供试物的性质采 用适宜的方法。分别配制不同浓度的供试物药液,于96h的试验期间每天观察并记录蝌蚪的中毒症状 和死亡数,并求出24h、48h、72h和96h的LC50值及95%置信限。 4 试验方法 4.1 材料和条件 4.1.1 供试生物 推荐使用泽蛙(RanaLimnocharis)或非洲爪蟾(Xenopuslaevis)蝌蚪。具体龄期和适宜水温见附 录A。如果选用其他两栖类作为试验材料,应该采用能够满足其生理要求的相应驯养和试验条件,并加 以说明。 试验用蝌蚪应选用健康无病、龄期一致的蝌蚪。试验前在室内预养3d,试验前一天停止喂食,试验 中亦不喂食。 4.1.2 供试物 农药制剂、原药或纯品。对难溶于水的农药,可用少量对蝌蚪低毒的有机溶剂助溶,用量不得超过 0.1mL(g)/L。 4.1.3 主要仪器设备 主要仪器设备如下: ———溶解氧测定仪; ———温度计; ———酸度计; ———玻璃缸; ———量筒等。 4.1.4 试验用水 试验用水为经活性炭处理、存放并曝气处理24h以上的自来水或能注明配方的稀释水。水质硬度 在10mg/L~250mg/L之间(以CaCO3计),pH在6.0~8.5之间,溶解氧含量不应低于空气饱和值 (ASV)的60%。 4.1.5 承载量 静态和半静态试验系统最大承载量为1.0g(受试生物)/L,流水式试验系统承载量可高一些。 2GB/T31270.18—2014 4.1.6 试验条件 光暗比16h∶8h,或者自然光照。 4.2 试验操作 4.2.1 方法的选择 应根据供试物的特性选择静态试验法、半静态试验法或流水式试验法。如使用静态或半静态试验 法,应确保试验期间试验药液中供试物浓度不低于初始浓度的80%。如果在试验期间试验药液中供试 物浓度发生超过20%的偏离,则应检测试验药液中供试物的实际浓度并以此计算结果,或使用流动试 验法进行试验,以稳定试验药液中供试物浓度。 4.2.2 预试验 按正式试验的条件,以较大的间距设置4个~5个浓度组。通过预试验求出蝌蚪最高全存活浓度 和最低全致死浓度。 4.2.3 正式试验 在预试验确定的浓度范围内以一定几何级差(不超过2.2)设置5个~7个浓度组,并设一个空白对 照组,使用有机溶剂助溶的增设溶剂对照组,每个浓度设三个重复。每缸放入10只蝌蚪,试验开始后 6h内随时观察并记录试验用蝌蚪的中毒症状及死亡率,其后于24h、48h、72h和96h观察并记录蝌 蚪的中毒症状及死亡率,及时清除死蝌蚪。每天测定并记录试液温度、pH及溶解氧。 4.2.4 限度试验 设置上限浓度100mga.i./L,即供试物达100mga.i./L时供试生物死亡率未超过空白对照组,则 无需继续进行试验。若供试物溶解度小于100mga.i./L,则采用其溶解度上限作为试验浓度。 4.3 数据处理 4.3.1 统计分析方法的选择 可采用寇氏法、直线内插法或概率单位图解法计算每一观察时间(24h、48h、72h和96h)的天敌 两栖类急性毒性的半致死浓度LC50,也可采用数据统计软件进行分析和计算。 4.3.2 寇氏法 用寇氏法可求出天敌两栖类在24h、48h、72h、和96h的LC50值及95%置信限。 LC50的计算见式(1): logLC50=Xm-i∑P-0. ( )5 …………………………(1) 式中: Xm———最高浓度的对数; i———相邻浓度比值的对数; ∑P———各组死亡率的总和(以小数表示)。 95%置信限的计算见式(2): 95%置信限=logLC50±1.96SlogLC50…………………………(2) 标准误的计算见式(3): 3GB/T31270.18—2014 SlogLC50=i∑pq n…………………………(3) 式中: p———1个组的死亡率; q———1-p; n———各浓度组两栖类的数量。 4.3.3 直线内插法 采用线性刻度坐标,绘制试验物质浓度对死亡百分率的曲线,求出50%死亡时的LC50值。 4.3.4 概率单位图解法 用半对数纸,以浓度对数为横坐标、死亡百分率对应的概率单位为纵坐标绘图。将各实测值在图上 用目测法画一条相关直线,从直线中读出致死50%的浓度对数,估算出LC50值。 4.4 质量控制 质量控制条件: ———驯养期间死亡率不得超过5%; ———试验期间对照组死亡率不超过10%,且无异常行为出现; ———试验期间,试验溶液的溶解氧含量不应低于空气饱和值(ASV)的60%。 5 试验报告 试验报告至少应包括下列内容: ———供试物的信息,包括供试农药的通用名、化学名称、结构式、CAS号、纯度、基本理化性质、来 源等; ———供试生物名称、来源、大小及驯养情况; ———试验条件,包括试验温度、光照等,所采用稀释水的温度、溶解氧浓度及pH等; ———试验药液的浓度及24h、48h、72h和96h的LC50值和95%置信限,并给出所采用的计算 方法; ———对照组蝌蚪是否出现死亡及异常反应; ———观察到的毒性效应,如受试蝌蚪的任何不正常的行为、中毒症状等; ———对天敌两栖类的毒性等级划分参见附录B。 4GB/T31270.18—2014 附 录 A (规范性附录) 供试生物龄期及培养水温要求 试验用蝌蚪的龄期和水温条件参考表A.1。 表A.1 试验用蝌蚪的龄期和适宜水温 蛙种 龄期 适宜水温 泽蛙 6d~10d(Gosner25期) 20℃~25℃ 非洲爪蟾 6d~10d(N