ICS65.100 B13 中华人民共和国国家标准 GB/T31270.17—2014 化 化学农药环境安全评价试验准则 第17部分:天敌赤眼蜂急性毒性试验 Testguidelinesonenvironmentalsafetyassessmentforchemicalpesticides— Part17:Trichogrammaacutetoxicitytest 2014-10-10发布 2015-03-11实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会发布前 言 GB/T31270《化学农药环境安全评价试验准则》分为21个部分: ———第1部分:土壤降解试验; ———第2部分:水解试验; ———第3部分:光解试验; ———第4部分:土壤吸附/解吸试验; ———第5部分:土壤淋溶试验; ———第6部分:挥发性试验; ———第7部分:生物富集试验; ———第8部分:水-沉积物系统降解试验; ———第9部分:鸟类急性毒性试验; ———第10部分:蜜蜂急性毒性试验; ———第11部分:家蚕急性毒性试验; ———第12部分:鱼类急性毒性试验; ———第13部分:溞类急性活动抑制试验; ———第14部分:藻类生长抑制试验; ———第15部分:蚯蚓急性毒性试验; ———第16部分:土壤微生物毒性试验; ———第17部分:天敌赤眼蜂急性毒性试验; ———第18部分:天敌两栖类急性毒性试验; ———第19部分:非靶标植物影响试验; ———第20部分:家畜短期饲喂毒性试验; ———第21部分:大型甲壳类生物毒性试验。 本部分是GB/T31270的第17部分。 本部分按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本部分由中华人民共和国农业部提出并归口。 本部分负责起草单位:农业部农药检定所、环保部南京环境科学研究所。 本部分主要起草人:林荣华、陈红英、王红、韩志华、张燕宁、余向阳、薛明、吴若涵。 ⅠGB/T31270.17—2014 化学农药环境安全评价试验准则 第17部分:天敌赤眼蜂急性毒性试验 1 范围 GB/T31270的本部分规定了化学农药对赤眼蜂成蜂急性毒性试验的材料、条件、操作、质量控制、 数据处理、试验报告等的基本要求。 本部分适用于为化学农药登记而进行的赤眼蜂成蜂急性毒性试验,其他类型的农药可参照使用。 本部分不适用于易挥发和难溶解的化学农药。 2 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 2.1 半致死用量 medianlethalrate 在急性毒性试验中,引起50%供试生物死亡时的供试物使用量,用LR50表示。 注:单位为mga.i./cm2,即单位面积上所附着的供试物有效成分的量。 2.2 安全系数 safetyfactor 赤眼蜂的半致死用量LR50与供试农药的田间推荐施用浓度的比值,可用式(1)表示: 安全系数=药物对赤眼蜂的LR50(mga.i./cm2) 该药物的田间推荐施用浓度(mga.i./cm2)…………………(1) 2.3 供试物 testsubstance 试验中需要测试的物质。 2.4 化学农药 chemicalpesticide 利用化学物质人工合成的农药。其中有些以天然产品中的活性物质为母体,进行仿制、结构改造, 创新而成,为仿生合成农药。 同义词:有机合成农药syntheticorganicpesticide。 [NY/T1667.1—2008,定义2.3.1] 2.5 原药 technicalmaterial 在制造过程中得到的有效成分及杂质组成的最终产品,不能含有可见的外来物质和任何添加物,必 要时可加入少量的稳定剂。 [NY/T1667.2—2008,定义2.5.1] 2.6 制剂 formulationproduct 由农药原药(或母药)和助剂制成使用状态稳定的产品。 [NY/T1667.2—2008,定义2.4] 1GB/T31270.17—2014 2.7 有效成分 activeingredient;a.i. 农药产品中具有生物活性的特定化学结构成分。 [NY/T1667.2—2008,定义3.1] 3 试验概述 将供试物用丙酮等溶剂配制成系列不同浓度的稀释液,定量加入指形管中滚吸成药膜管,然后将试 验用赤眼蜂放入其中爬行1h后转入无药指形管,24h后调查管中的死亡和存活蜂数。求出农药对赤 眼蜂的LR50值和95%置信限。 4 试验方法 4.1 材料和条件 4.1.1 供试生物 选择松毛虫赤眼蜂(Trichogrammadendrolimi)、玉米螟赤眼蜂(Trichogrammaostriniae)、稻螟 赤眼蜂(Trichogrammajaponicum)、广赤眼蜂(Trichogrammaevanescens)、拟澳洲赤眼蜂(Tri- chogrammaconfusum)或舟蛾赤眼蜂(Trichogrammaclosterae)等的其中一种进行试验。 4.1.2 供试寄主生物 柞蚕(Antheraeapernyi)卵或米蛾(Corcyracephalonica)卵。 4.1.3 供试物 农药制剂、原药或纯品。制剂用蒸馏水溶解,原药或纯品用丙酮等溶剂溶解。 4.1.4 主要仪器设备 主要仪器设备如下: ———指形管; ———人工气候箱; ———移液器; ———容量瓶等。 4.1.5 试验条件 试验应在温度25℃±2℃、相对湿度70%~80%、避光条件下进行。 4.2 试验操作 4.2.1 试验用成蜂的预培养 将被寄生的寄主卵置于温度25℃±2℃、相对湿度50%~80%、避光条件下培养,羽化出的成蜂用 于急性毒性试验。试验成蜂应来源于同一时间、同一批次的寄生卵。大量出蜂一般在开始羽化后的 24h左右,试验应使用开始羽化后48h内羽化的成蜂。 2GB/T31270.17—2014 4.2.2 预试验 按正式试验的条件,以较大的间距设置4个~5个浓度组,求出试验用赤眼蜂最高全存活剂量与最 低全致死剂量,以确定正式试验的用药剂量范围。 4.2.3 正式试验 根据预试验结果,正式试验按等比关系设置至少5个梯度浓度(几何级差应控制在2.2倍以内),并 设空白对照组,用溶剂溶解的还需设溶剂对照组,对照组和每个处理组均设3个重复,每个重复100头± 10头赤眼蜂。在指形管中加入定量的供试药液,将药液在指形管中充分滚吸直至晾干制成药膜管,然 后将供试赤眼蜂放入药膜管中爬行1h后转入无药指形管中,饲喂10%蜂蜜水,并封紧管口。对照组的 成蜂数量与处理组相同,对照组与处理组应同时进行。在转入无药指形管中24h后检查并记录管中死 亡和存活蜂数。 4.2.4 限度试验 设置上限剂量为供试物田间施用量的10倍。若试验用赤眼蜂在供试物达到上限用量时未出现死 亡,则无需继续试验;若供试物溶解度小于田间施用量的10倍时,则采用其最大溶解度作为上限浓度。 4.3 数据处理 4.3.1 统计分析方法的选择 LR50的计算可采用直线内插法、概率单位图解法或机率值法估算,也可应用有关毒性数据计算软 件进行分析和计算。 4.3.2 寇氏法 用寇氏法可求出赤眼蜂在24h的LR50值及95%置信限。LR50的计算见式(2): logLR50=Xm-i(∑P-0.5) …………………………(2) 式中: Xm———最高浓度的对数; i———相邻浓度比值的对数; ∑P———各组死亡率的总和(以小数表示)。 95%置信限的计算见式(3): 95%置信限=logLR50±1.96SlogLR50…………………………(3) 标准误的计算见式(4): SlogLR50=i∑pq n…………………………(4) 式中: p———1个组的死亡率; q———1-p; n———各浓度组赤眼蜂的数量。 4.3.3 直线内插法 采用线性刻度坐标,绘制死亡百分率对试验物质浓度的曲线,求出50%死亡时的LR50值。 3GB/T31270.17—2014 4.3.4 概率单位图解法 用半对数纸,以浓度对数为横坐标、死亡百分率对应的概率单位为纵坐标绘图。将各实测值在图上 用目测法画一条相关直线,从直线中读出致死50%的浓度对数,估算出LR50值。 4.4 质量控制 试验结束时,对照组死亡率不超过10%。 5 试验报告 试验报告至少应包括下列内容: ———供试物的信息,包括供试农药的通用名、化学名称、结构式、CAS号、纯度、基本理化性质、来 源等; ———供试生物的名称、来源、培养方法; ———试验条件,包括试验温度、湿度、光照等; ———试验药液的浓度,LR50(24h)值和95%置信限,并给出所采用的计算方法; ———对照组赤眼蜂是否出现死亡及异常反应; ———试验质量控制条件描述; ———农药对赤眼蜂的毒性登记划分参见附录A。 4GB/T31270.17—2014 附 录 A (资料性附录) 农药对赤眼蜂风险等级划分 按安全系数评价农药对赤眼蜂的安全性,将农药对赤眼蜂的风险分为四级,见表A.1。 表A.1 农药对赤眼蜂的风险性等级划分 风险性等级 安全系数 极高风险性 安全系数≤0.05 高风险性 0.05<安全系数≤0.5 中等风险性 0.5<安全系数≤5 低风险性 安全系数>5 5GB/T31270.17—2014 参 考 文 献 [1] NY/T1667.1—2008 农药登记管理术语 第1部分:基本术语 [2] NY/T1667.2—2008 农药登记管理术语 第2部分:产品化学 [3] USEPA(2012).Honeybeeacuteco