中华人民共和国国家标准 GB4789.30—2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 单核细胞增生李斯特氏菌检验 2016-12-23发布 2017-06-23实施 中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会 国家食品药品监督管理总局发布GB4789.30—2016 Ⅰ 前 言 本标准代替GB4789.30—2010《食品安全国家标准 食品微生物学检验 单核细胞增生李斯特氏 菌检验》。 本标准与GB4789.30—2010相比,主要变化如下: ———增加了“第二法 单核细胞增生李斯特氏菌平板计数法”; ———增加了“第三法 单核细胞增生李斯特氏菌MPN计数法”; ———修改了范围。GB4789.30—2016 1 食品安全国家标准 食品微生物学检验 单核细胞增生李斯特氏菌检验 1 范围 本标准规定了食品中单核细胞增生李斯特氏菌(Listeriamonocytogenes)的检验方法。 本标准第一法适用于食品中单核细胞增生李斯特氏菌的定性检验;第二法适用于单核细胞增生李 斯特氏菌含量较高的食品中单核细胞增生李斯特氏菌的计数;第三法适用于单核细胞增生李斯特氏菌 含量较低(<100CFU/g)而杂菌含量较高的食品中单核细胞增生李斯特氏菌的计数,特别是牛奶、水以 及含干扰菌落计数的颗粒物质的食品。 2 设备和材料 除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下: 2.1 冰箱:2℃~5℃。 2.2 恒温培养箱:30℃±1℃、36℃±1℃。 2.3 均质器。 2.4 显微镜:10x~100x。 2.5 电子天平:感量0.1g。 2.6 锥形瓶:100mL、500mL。 2.7 无菌吸管:1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)或微量移液器及吸头。 2.8 无菌平皿:直径90mm。 2.9 无菌试管:16mm×160mm。 2.10 离心管:30mm×100mm。 2.11 无菌注射器:1mL。 2.12 单核细胞增生李斯特氏菌(Listeriamonocytogenes)ATCC19111或CMCC54004,或其他等效 标准菌株。 2.13 英诺克李斯特氏菌(Listeriainnocua)ATCC33090,或其他等效标准菌株。 2.14 伊氏李斯特氏菌(Listeriaivanovii)ATCC19119,或其他等效标准菌株。 2.15 斯氏李斯特氏菌(Listeriaseeligeri)ATCC35967,或其他等效标准菌株。 2.16 金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)ATCC25923或其他产β-溶血环金葡菌,或其他等效标 准菌株。 2.17 马红球菌(Rhodococcusequi)ATCC6939或NCTC1621,或其他等效标准菌株。 2.18 小白鼠:ICR体重18g~22g。 2.19 全自动微生物生化鉴定系统。 3 培养基和试剂 3.1 含0.6%酵母浸膏的胰酪胨大豆肉汤(TSB-YE):见A.1。GB4789.30—2016 2 3.2 含0.6%酵母浸膏的胰酪胨大豆琼脂(TSA-YE):见A.2。 3.3 李氏增菌肉汤LB(LB1,LB2):见A.3。 3.4 1%盐酸吖啶黄(acriflavineHCl)溶液:见A.3.2.1、A.3.2.2。 3.5 1%萘啶酮酸钠盐(naladixicacid)溶液:见A.3.2.1、A.3.2.2。 3.6 PALCAM琼脂:见A.4。 3.7 革兰氏染液:见A.5。 3.8 SIM动力培养基:见A.6。 3.9 缓冲葡萄糖蛋白胨水[甲基红(MR)和V-P试验用]:见A.7。 3.10 5%~8%羊血琼脂:见A.8。 3.11 糖发酵管:见A.9。 3.12 过氧化氢试剂:见A.10。 3.13 李斯特氏菌显色培养基。 3.14 生化鉴定试剂盒或全自动微生物鉴定系统。 3.15 缓冲蛋白胨水:见A.11。 第一法 单核细胞增生李斯特氏菌定性检验 4 检验程序 单核细胞增生李斯特氏菌定性检验程序见图1。 图1 单核细胞增生李斯特氏菌定性检验程序