中华人民共和国国家标准 GB 4789.14—2014 食品安全 国家标准 食品微生物学检验 蜡样芽胞杆菌检验 （） 2014-12-01发布 2015-05-01实施 GB 4789.14—2014 I 前 言 本标准代替 GB/T 4789.14 -2003《食品卫生微生物学检验 蜡样芽胞杆菌检验》 。 本标准与 GB/T 4789.14 -2003相比，主要变化如下： ——修改了标准的中文名称； ——增加了第二法 蜡样芽胞杆菌 MPN 计数法； ——将选择性分离培养基 （MYP）培养条件由 37 ℃培养 12 h～20 h改为 30 ℃± 1 ℃培养 24 h～ 48 h； ——增加了溶菌酶试验 ； ——修改了操作步骤； ——增加了附录 A、附录 B。 GB 4789.14—2014 1 食品安全国家标准 食品微生物学检验 蜡样芽胞杆菌检验 1 范围 本标准规定了食品中蜡样芽胞杆菌（ Bacillus cereus ）的检验方法。 本标准第一法适用于 蜡样芽胞杆菌 含量较高的食品中 蜡样芽胞杆菌 的计数；第二法 适用于蜡样芽胞杆 菌含量较低 的食品样品中 蜡样芽胞杆菌 的计数。 2 设备和材料 除微生物实验室常规 灭菌及培养设备外， 其他设备和材料如下： a) 冰箱： 2 ℃～5 ℃； b) 恒温培养箱： 30 ℃± 1 ℃、36 ℃± 1 ℃； c) 均质器； d) 电子天平：感量 0.1 g ； e) 无菌锥形瓶： 100 mL、500 mL； f) 无菌吸管： 1 mL（具 0.01 mL刻度） 、 10 mL（具 0.1 mL刻度）或微量移液器及吸头 ； g) 无菌平皿：直径 90 mm； h) 无菌试管： 18 mm× 180 mm； i) 显微镜： 10倍～100倍（油镜）； j) L涂布棒。 3 培养基和试剂 3.1 磷酸盐缓冲液（ PBS） ：见附录 A中A.1。 3.2 甘露醇卵黄 多黏菌素 （MYP）琼脂：见附录 A中A.2。 3.3 胰酪胨大豆 多黏菌素 肉汤：见附录 A中A.3。 3.4 营养琼脂：见附录 A中A.4。 3.5 过氧化氢溶液： 见附录 A中A.5。 3.6 动力培养基： 见附录 A中A.6。 3.7 硝酸盐肉汤 ：见附录 A中A.7。 3.8 酪蛋白琼脂： 见附录 A中A.8。 3.9 硫酸锰营养琼脂培养基： 见附录 A中A.9。 3.10 0.5%碱性复红 ：见附录 A中A.10。 3.11 动力培养基 ：见附录 A中A.11。 3.12 糖发酵管： 见附录 A中A.12。 3.13 V-P培养基： 见附录 A中A.13。 3.14 胰酪胨大豆羊血 （TSSB）琼脂：见附录 A中A.14。 3.15 溶菌酶营养肉汤： 见附录 A中A.15。 3.16 西蒙氏柠檬酸 盐培养基： 见附录 A中A.16。 3.17 明胶培养基： 见附录 A中A.17。 GB 4789.14—2014 2 4 蜡样芽胞杆菌 平板计数法 （第一法） 4.1 检验程序 蜡样芽胞杆菌平板计数法检验程序见图 1。 图1 蜡样芽胞杆菌平板计数法 检验程序 图1 蜡样芽胞杆菌平板计数法检验程序 4.2 操作步骤 4.2.1 样品处理 冷冻样品应在 45 ℃以下不超过 15 min或在 2 ℃～5 ℃不超过 18 h解冻，若不能及时检验，应放于 -10 ℃ ~ -20 ℃保存；非冷冻而易腐的样品应尽可能及时检验，若不能及时检验，应置于 2 ℃～5 ℃冰箱 保存， 24 h内检验。 4.2.2 样品制备 称取样品 25 g，放入盛有 225 mL PBS 或生理盐水的无菌均质杯内，用旋转刀片式均质器以 8000 r/min～10000 r/min 均质 1 min～2 min，或放入盛有 225 mL PBS 或生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式 均质器拍打 1 min～2 min。若样品为液态，吸取 25 mL 样品至盛有 225 mL PBS 或生理盐水的无菌锥形 瓶(瓶内可预置适当数量的无菌玻璃珠 )中，振荡混匀，作为 1:10的样品匀液。 4.2.3 样品的稀释 吸取 4.2.2中1:10的样品匀液 1 mL加到装有 9 mL PBS或生理盐水的稀释管中， 充分混匀制成 1:100 的样品匀液。 跟据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次制成十倍递增系列稀释样品匀液。每递增 稀释 1次，换用 1支1mL无菌吸管或吸头。 10倍系列稀释 检样 25 g(或25mL)样品+225 mL 稀释液，均质 选取2个～3个适宜的连续稀释度的样品匀液，涂布 MYP琼脂平板 典型菌落计数及 确定鉴定 报 告 30 ℃±1 ℃ 24 h～48 h