ICS 65.150 B 50 备案号:38199-2013 北 DB11 京 市 地 方 标 准 DB11/T 987—2013 鲟鱼种质鉴定规范 Rules of sturgeon germplasm identification 2013 - 06 - 21 发布 北京市质量技术监督局 2013 - 10 - 01 实施 发 布 DB11/T 987—2013 目 次 前言................................................................................. II 1 范围............................................................................... 1 2 规范性引用文件..................................................................... 1 3 学名与分类......................................................................... 1 4 生物学特征......................................................................... 1 5 生长与繁殖......................................................................... 2 6 遗传学特征......................................................................... 3 7 检测方法........................................................................... 5 8 检测规则........................................................................... 7 参考文献.............................................................................. 8 I DB11/T 987—2013 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由北京市农业局提出。 本标准由北京市农业标准化技术委员会归口。 本标准由北京市农业局组织实施。 本标准起草单位：北京市水产科学研究所。 本标准主要起草人：胡红霞、朱华、董颖、田照辉、王巍。 II DB11/T 987—2013 鲟鱼种质鉴定规范 1 范围 本标准适用于西伯利亚鲟（Acipenser baerii）种质的检测和鉴定。 本标准给出了西伯利亚鲟的学名与分类、主要生物学特征、生长与繁殖、遗传学特征及检测方法。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 17716 青鱼 GB/T 18654.2 养殖鱼类种质检验 第2部分 抽样方法 3 学名与分类 3.1 学名 西伯利亚鲟（Acipenser baerii） 3.2 分类地位 属鲟形目（Acipenseriformes）, 鲟科（Acipenseridae）,鲟属(Acipenser)。 4 生物学特征 4.1 外部形态 鱼体修长，呈纺锤形，横切呈五角形，向尾部延伸变细，吻长尖，口腹位，口裂较小，一字形。歪 形尾，鳃盖骨愈合为一,鳃盖膜彼此不相连而与颊部相连。体裸露无鳞具五列骨板，1列背骨板，2两列 侧骨板，2列腹骨板；第一背骨板不是最大的骨板,身体最高点不在第一骨板处；侧骨板通常与躯干部颜 色相似；腹骨板与背骨板间具有许多星状薄骨板或微小颗粒，吻须4根，介于吻突与口裂之间，稍靠近 口裂。鳃耙有结节，一般为3个。 鱼体背部呈淡灰黑色或暗褐色，两侧较淡，腹部为白色。 西伯利亚鲟的外部形态见图1。 1 DB11/T 987—2013 图1 西伯利亚鲟外部形态图（引自 FAO） 4.2 可数性状 背鳍鳍式：D.30～56。 臀鳍鳍式：A.17～33。 背骨板数：10～20。 侧骨板数：37～56，通常为42～47。 腹骨板数：7～16。 第一鳃弓（左）外侧鳃耙数：20～49，通常为27～32。 4.3 可量性状比例 西伯利亚鲟鱼种、成鱼和亲鱼的可量性状比例见表1。 表1 西伯利亚鲟的可量性状比例（平均值±标准差） 年龄 项目 鱼种（8 月龄） 成鱼（3 龄） 亲鱼（10 龄） 全长/体长 a 1.31±0.04 1.25±0.06 1.28±0.04 体长/体高 6.65±0.64 6.15±0.04 5.53±0.51 体长/头长 3.69±0.25 3.79±0.34 4.09±0.28 头长/吻长 1.74±0.17 2.09±0.18 2.09±0.17 头长/眼径 22.13±1.97 23.52±6.72 23.70±4.21 头长/眼间距 3.59±0.48 3.17±0.39 3.29±0.30 头长/尾柄高 8.47±1.23 6.39±1.51 5.75±1.01 尾柄长/尾柄高 2.84±0.64 2.28±0.57 2.5±0.52 a 采用从吻端到尾鳍基部的长度 5 生长与繁殖 5.1 生长 2 DB11/T 987—2013 在人工养殖条件下,不同年龄组的西伯利亚鲟鱼体长和体重范围见表2。 表2 西伯利亚鲟各年龄组体长和体重范围 年龄 a 1 2 3 4 5 体长 cm 40～50 50～70 70～85 90～100 100～120 体重 g 400～600 1500～2000 3000～4000 5000～7000 7000～9000 a 依据北方地区流水养殖模式，年龄以周年计 5.2 繁殖 性成熟年龄：自然条件下雌鱼为19龄～20龄，雄鱼为17龄～18龄；人工养殖条件下雌鱼为7龄以上， 雄鱼为5龄以上。繁殖周期：野生状态下为2年以上；人工养殖条件下为1年以上。怀卵量占体重的10%～ 30%。 6 遗传学特征 6.1 细胞遗传学特征 采用流式细胞仪测定西伯利亚鲟鱼细胞中DNA含量为N=8.98±0.115 pg。 6.2 生化遗传学特征 西伯利亚鲟肝脏酯酶（EST）同工酶有6条酶带，电泳图及酶带电泳模式图见图2。 1为电泳图谱，2为模式图 图2 西伯利亚鲟肝脏酯酶电泳图谱及模式图 6.3 分子遗传学标记 6.3.1 西伯利亚鲟特异性 RAPD 遗传图谱的建立及特征标记 RAPD引物（CCGCCCAAAC）PCR扩增的结果如图3所示。 3 DB11/T 987—2013 图3 RAPD 引物的扩增产物 1 为西伯利亚鲟池，2、3 为西伯利亚鲟个体，4 为 marker 6.3.2 西伯利亚鲟微卫星 DNA 分子标记的建立 采用14对微卫星引物进行基因型鉴定，西伯利亚鲟在这14对引物的等位基因长度范围见表3。基因 型数据分析结果见图4。 表3 14 个微卫星引物序列及其在西伯利亚鲟的等位基因长度范围 引物序列 位点名称 4 (5’-3’) 等位基因长度范围 (bp) Atr-1101 F:TATCCCCTCCACTGGAAAT R: GTTAAACATCCCTGCCTTCA 143～203 Atr-105 F:CGATTTGATTGGCTCTTGTA R: TGCAAATAAATTGGAGCTGA 157～173 Atr-107 F:GGCAGGATTACATCTCCTGA R: TTACTAACTGCTAGATAATACCTCTCT 188～242 Atr-109 F:ACCCGAGCTGTCACATTACT R: AAAATAACGCGAATTCCTGA 162～300 Atr-114 F:GCAATTCGTGTTATGTTCATTT R: TGCATTCAGAGAATAACCGA 201～251 Atr-117 F:TGCATGACACAGGACTTACC R: TGCCTCTCAATAGCAACATC 191～259 Abr 39 F:ACCCGCAATTATTAGGAC R: CAGGACAAACTCAGACCC 178～276 Abr 40 F:TCACGCAGTCTCACAAGG R: TTCAATGGCAAACAGCAC 384～418 Abr 41 F:ACACTATCCCGCCACAAT R: CCACTGAAGCCATCATCT 322～410 Afu19 F:CATCTTAGCCGTCTGTGGTAC R: CAGGTCCCTAATACAATGGC 120～139 Afu22 F:TCCACAATCCTGAATAATGAC R: GCACCATCTAATACGAAATTG 140～242 Afu39 F:TTCTGAAGTTCACACATTG R: ATGGAGCATATTGGAAGG 119～140 Afu54 F:CTCTAGTCTTTGTTGATTACAG R: CAAAGGACTTGAAACTAGG 149～221 Afu68 F:TTATTGCATGGTGTAGCTAAAC R: AGCCCAACACAGACAATATC 128～250 DB11/T 987—2013 表示西伯利亚鲟品种池 表示非西伯利亚鲟样品 图4 微卫星标记基因型数据分析结果图 7 检测方法 7.1 繁殖力检测 按照GB 17716的生物测定方法。 7.2 细胞遗传学特征测定 7.2.1 采鲟鱼尾动脉血 0.5ml，加入肝素处理过的 1.5mL 小指管中，低速（1000rpm）离心 3 min，弃 上清。用 0.8%的生理盐水洗涤三次后，在管中加满 70%的冷乙醇固定过夜，注意固定时使细胞充分散开。 6 7.2.2 取细胞悬液浓度调整到 10 cell/ml 样品 1ml，用 RNA 酶 10 μg/ml～20μg/ml 37℃水浴消化 0.5h；碘化丙碇 50μg/ml 4℃染色 30min。 7.2.3 将处理过的样品用细绢布过滤后，加入