ICS 65.120 B 46 DB37 山 东 省 地 方 标 准 DB 37/T 3629—2019 饲料中氟虫腈的测定 液相色谱—串联质谱法 2019 - 07 - 23 发布 山东省市场监督管理局 2019 - 08 - 23 实施 发 布 DB37/T 3629—2019 目 次 前言 ................................................................................ II 1 范围 ............................................................................... 1 2 规范性引用文件 ..................................................................... 1 3 原理 ............................................................................... 1 4 试剂或材料 ......................................................................... 1 5 仪器设备 ........................................................................... 2 6 样品 ............................................................................... 2 7 试验步骤 ........................................................................... 2 7.1 7.2 7.3 7.4 提取 ........................................................................... 净化 ........................................................................... 标准工作曲线的制备 ............................................................. 仪器测定 ....................................................................... 2 2 2 2 8 试验数据处理 ....................................................................... 4 9 精密度 ............................................................................. 4 附 录 A （资料性附录） 氟虫腈标准溶液图谱 .......................................... 5 I DB37/T 3629—2019 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由山东省畜牧兽医局提出并监督实施。 本标准由山东省畜牧业标准化技术委员会归口。 本标准负责起草单位：山东省饲料质量检验所，青岛市华测检测技术有限公司。 本标准主要起草人：张芸、刘涛、刘雪芹、孙延军、莫贞峰、李斌、李俊玲。 II DB37/T 3629—2019 饲料中氟虫腈的测定 液相色谱—串联质谱法 1 范围 本标准规定了饲料中氟虫腈的测定方法。 本标准适用于配合饲料、浓缩饲料、添加剂预混合饲料和植物源饲料原料中氟虫腈的测定。 本标准氟虫腈的检出限为0.002 mg/kg，定量限为0.005 mg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 20195 动物饲料 试样的制备 3 原理 样品用乙腈提取，经C18固相萃取柱、液液分配净化后，液相色谱串联质谱仪测定，外标法定量。 4 试剂或材料 除非另有规定，仅使用分析纯试剂。 4.1 水：GB/T 6682，一级。 4.2 甲醇：色谱纯。 4.3 乙腈：色谱纯。 4.4 乙酸铵：色谱纯。 4.5 甲酸：色谱纯。 4.6 80 %乙腈水溶液：将 80 mL 乙腈与 20 mL 水混合均匀。 4.7 80 %甲醇水溶液：将 80 mL 甲醇与 20 mL 水混合均匀。 4.8 0.1 %甲酸水溶液（含 4 mmol/L 乙酸铵）：称取 0.308 g 乙酸铵于适量水中，准确加入甲酸 1 mL， 用水定容至 1 000 mL。 4.9 氟虫腈标准储备液（1 mg/mL）：称取氟虫腈对照品（CAS：120068-37-3，纯度不低于 98.7 %） 10 mg(准确至 0.01 mg)于 10 mL 棕色容量瓶中，用甲醇(4.2)溶解定容。-18 ℃避光保存，有效期为 1 年。 4.10 氟虫腈标准工作液Ⅰ(100 μ g/mL)：准确移取氟虫腈标准储备液（4.8）1 mL 于 10 mL 棕色容量 瓶中，用甲醇稀释定容。2～8 ℃保存，有效期为 1 个月。 4.11 氟虫腈标准工作液Ⅱ(1 μ g/mL)：准确移取氟虫腈标准工作液Ⅰ（4.9）0.1 mL 于 10 mL 棕色容 量瓶中，用甲醇稀释定容。2～8 ℃保存，有效期为 1 个月。 4.12 C18 固相萃取柱：1 000 mg/6 mL，或性能相当者。 1 DB37/T 3629—2019 4.13 微孔滤膜：0.22 μ m，有机系。 5 仪器设备 5.1 5.2 5.3 5.4 5.5 5.6 5.7 液相色谱－串联质谱仪：配电喷雾离子源（ESI）。 电子天平：感量 0.000 1 g 和 0.01 mg。 旋涡混合器。 离心机：转速不低于 10 000 r/min。 固相萃取装置。 超声波振荡器。 氮吹仪。 6 样品 按GB/T 20195制备样品，至少200 g，粉碎过0.42 mm孔径的分析筛，充分混匀，装入磨口瓶中避光 保存备用。 7 试验步骤 7.1 提取 平行做两份试验。称2 g（准确至0.01 g）样品于50 mL离心管，准确加入25 mL乙腈(4.3)，振荡提 取20 min，4 500 r/min离心5 min，取上层乙腈2.5 mL于15 mL的离心管，加入0.5 mL水，涡旋混匀待 用。 7.2 净化 C18固相萃取柱分别用6 mL乙腈和6 mL水活化，接收加载液，于50 mL离心管中，近自然滴干时，再 加入12 mL 80 %乙腈水(4.6)，并同时接收于上述离心管中，加入约1.5 g NaCl使上述溶液饱和，振荡， 4 500 r/min离心5 min，取上层乙腈层浓缩至干。准确加入4 mL 80 %甲醇水(4.7)溶液定容，过0.22 μ m滤膜，待测。 7.3 标准工作曲线的制备 准确量取适量标准工作液，用80 %甲醇水溶液(4.7)稀释成浓度分别为0.1、0.2、0.5、1.0、5.0 μ g/L的标准溶液，现用现配，供液相色谱-串级质谱仪测定。 对于基质效应较大的样品，采用基质空白溶液配制标准溶液进行定量。 7.4 仪器测定 7.4.1 液相色谱参考条件 色谱柱：BEH C18柱，长50 mm，内径2.1 mm，粒径1.7 μ m，或性能相当者。 柱温：40 ℃。 流速：0.3 mL/min。 进样量：1 μ L。 流动相：A为甲醇（4.2）；B为0.1 %甲酸水溶液（4.8），梯度洗脱条件见表1。 2 DB37/T 3629—2019 表1 梯度洗脱程序表 时间，min 流速,mL/min A，% B，% 1 initial 0.3 10 90 2 1.5 0.3 95 5 3 3.5 0.3 95 5 4 3.51 0.3 10 90 7.4.2 质谱参考条件 离子化模式及扫描方式：电喷雾负离子扫描（ESI-）。 检测方式：多反应检测（MRM）。 气帘气(Curtain GAS) 35 Psi。 碰撞气( Collision GAS) 8 Psi。 喷雾电压(IonSpray Voltage) -2 500 V。 雾化源温度(Temperature) 400 ℃。 雾化气(Ion Source GAS1) 55 Psi。 辅助加热气（Ion Source GAS2) 55 Psi。 定性离子对、定量离子对及电压、碰撞能量见表2。 表2 质谱参数 名称 离子对（m/z） DP(V) CE（V） 定量离子 434.9＞329.9 -65 -24 定性离子 434.9＞249.9 -65 -36 氟虫腈 7.4.3 定性测定 在相同试验条件下，待测物在样品中的保留时间与标准工作液中的保留时间相对偏差在±2.5 %之 内，并且色谱图中定性离子对的相对丰度与浓度接近的标准工作液中相应定性离子对的相对丰度进行比 较，若相对偏差不超过表3规定的范围，则可判断为样品中存在对应的待测物。 表3 定性确证时相对离子丰度的最大允许误差 相对离子丰度（%） ＞50 ＞20～50 ＞10～20 ≤10 允许的相对偏差（%） ±20 ±25 ±30 ±50 7.4.4 定量测定 在仪器最佳工作条件下，将标准工作溶液（从低浓度到高浓度）和试样溶液上机测定，以标准工作 液中氟虫腈定量离子的峰面积为纵坐标，氟虫腈浓度为横坐标绘制标准工作曲线，对样品进行定量。试 样溶液中氟虫腈的响应值应在标准工作曲线测定的线性范围内。超出线性范围的则用80 %的甲醇水溶液 （4.7）适当稀释后再进样分析。在上述色谱-质谱条件下，氟虫腈标准工作液特征离子的多反应监测 （MRM）色谱图参见附录A。 3 DB37/T 3629—2019 8 试验数据处理 试样中氟虫腈的含量以质量分数ω 计，数值以毫克每千克（mg/kg）表示，多点校准按式(1)计算： ................................ (1) 式中： C —