(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210923428.8 (22)申请日 2022.08.02 (71)申请人 润原生物科技 （苏州） 有限公司 地址 215000 江苏省苏州市高新区马涧路 168号苏州生命健康小镇产业园2号楼 101、 107 (72)发明人 韩坤原　韩青霖　李玉海　 (74)专利代理 机构 苏州简理知识产权代理有限 公司 32371 专利代理师 高泽民 (51)Int.Cl. C12M 3/04(2006.01) C12M 1/00(2006.01) C12N 5/071(2010.01) B33Y 80/00(2015.01) (54)发明名称 一种细胞培 养3D打印支 架及细胞培 养方法 (57)摘要 本发明公开了一种细胞培养3D打印支架及 细胞培养方法， 其特征在于： 包括3D打印一体成 型的支架本体， 支架本体上设有多组细胞培养 孔， 所述细胞培养孔的两端分别与支架本体的外 壁相连通； 细胞培养方法为： ①用数字化3D打印 机一体打印成型， 得到预成型支架本体； ②对预 成型支架本体进行清理、 干燥； ③对预成型支架 本体进行灭菌处理， 得到成型支架本体； ④将成 型支架本放入培养皿、 培养板或培养瓶内， 用滴 管在成型支架本体上滴入需扩增细胞和培养基， 使培养基充分浸没成型支架 本体；⑤将装有成型 支架本体及细胞的培养皿、 培养板或培养瓶放入 二氧化碳培养箱内进行培养并定期更换培养基； ⑥待细胞培养好后进行收集。 本发 明提高了细胞 培养效率及质量。 权利要求书2页 说明书6页 附图2页 CN 115161199 A 2022.10.11 CN 115161199 A 1.一种细胞培养3D打印支架， 其特征在于： 包括支架本体， 所述支架本体为3D打印一体 成型结构， 所述支架本体上设有多组细胞培养孔， 所述细胞培养孔的两端分别与所述支架 本体的外壁相连通。 2.根据权利要求1所述的细胞培养3D打印支架， 其特征在于： 所述支架本体的外壁上设 有凸块及凹槽， 所述凸块能够卡设于相邻所述支 架本体的凹槽内。 3.根据权利要求2所述的细胞培养3D打印支架， 其特征在于： 所述支架本体的外壁上分 别设有两组凸块及两组凹槽， 两组所述凸块分别设置于所述支架本体相邻的两侧 壁上， 两 组所述凹槽 分别设置于所述支架本体相邻的另外两侧壁上， 且每组所述凹槽设置于一组所 述凸块的相对侧。 4.根据权利要求1所述的细胞培养3D打印支架， 其特征在于： 所述支架本体的长度为5 毫米～80毫米， 所述支架本体的宽度为5毫米～80毫米， 所述支架本体的高度为3毫米～30 毫米； 所述细菌 培养孔的孔径为10 0微米～80 0微米， 所述支 架本体的孔隙率 为50％～90％。 5.根据权利要求1所述的细胞培养3D打印支架， 其特征在于： 所述支架本体上设有涂 层， 所述涂层设置 于所述本体外壁以及所述细胞培 养孔的内壁上。 6.根据权利要求5所述的细胞培养3D打印支架， 其特征在于： 所述涂层为胶原蛋白、 甲 基丙烯酸酯化胶原、 多聚 ‑D‑赖氨酸、 丝素蛋白、 细胞纤连蛋白、 层粘连蛋白、 玻连蛋白、 明 胶、 甲基丙烯酸酯化明胶中的一种或多种。 7.根据权利要求1所述的细胞培养3D打印支架， 其特征在于： 所述支架本体采用金属材 料或非金属材料， 所述金属材料为钛、 钛合金、 钽金属、 不锈钢、 钴基合金中的一种或多种； 所述非金属材料为聚乙二醇及其聚合物、 聚乙二醇二丙烯酸酯、 胶原蛋白、 甲基丙烯酸酯化 胶原、 明胶、 甲基丙烯酸酯化明胶、 氧化铝、 氧化锆、 聚醚醚酮、 羟基磷灰石、 磷酸三钙、 硅酸 盐纳米黏土中的一种或多种。 8.一种应用权利要求1所述的细胞培养3D打印支架的细胞培养3D打印支架的细胞培养 方法， 其步骤为： ①用数字化3D打印机将设计的数字化支 架模型一体打印成型， 得到预成型支 架本体； ②对预成型支 架本体进行清理、 干燥； ③对步骤②中的预成型支 架本体进行灭菌处 理， 得到成型支 架本体； ④将成型支架本放入培养皿、 培养板或培养瓶内， 用滴管在成型支架本体上滴入需扩 增细胞和培 养基， 使培 养基充分浸没成型支 架本体； ⑤将装有成型支架本体及细胞的培养皿、 培养板或培养瓶放入二氧化碳培养箱内进行 培养并定期更 换培养基； ⑥待细胞培 养达到使用目的后进行冲洗， 将细胞进行收集。 9.根据权利要求8所述的细胞培养3D打印支架的细胞培养方法， 其特征在于： 在将预成 型支架本体灭菌之前， 将预成型本体支架浸没于涂层材料的溶液内， 静置4小时～24小时 后， 将预成型本体支架取出， 将其进 行烘干， 完成涂层涂覆， 涂层涂覆完成之后， 再进 行步骤 ③的灭菌处 理。 10.根据权利要求9所述的细胞培养3D打印支架 的细胞培养方法， 其特征在于： 待细胞 培养达到使用目的后， 对成型支架本体或具有涂层的成型支架本体先加入特异性酶， 使得 涂层或成型支架本体被特异性酶进行酶解， 涂层或成型支架本体被酶解后细胞自然脱落，权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115161199 A 2然后再进行冲洗， 将细胞进行收集。 11.根据权利要求8所述的细胞培养3D打印支架 的细胞培养方法， 其特征在于： 在步骤 ⑤中， 一组成型支架本体上的细胞培养完成之后， 在需要对细胞进 行传代培养时， 取全新的 成型支架本体， 将全新的成型支架本体的边缘与已培养细胞的成型支架本体进行拼接， 经 过凸块与凹槽进行拼接， 并使全新的成型支架本体浸没于培养基内， 使原成型支架本体上 的细胞可以迁移、 增殖或分化至新的成型支 架本体上， 完成传代培 养。 12.根据权利要求8所述的细胞培养3D打印支架 的细胞培养方法， 其特征在于： 所述预 成型支架本体采用金属材料或者非金属材料3D打印一体成型； 采用非金属材料时， 在非金 属材料中添加光引发剂或粘稠剂。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115161199 A 3