(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 20221093784 4.3 (22)申请日 2022.08.05 (71)申请人 上海生物制品研究所有限责任公司 地址 200052 上海市长 宁区延安西路1262 号 (72)发明人 王亮　程庆　谢蕾　刘清　卢捷　 徐敏菁　 (74)专利代理 机构 上海一平知识产权代理有限 公司 3126 6 专利代理师 徐迅　崔佳佳 (51)Int.Cl. A61K 39/25(2006.01) A61P 31/22(2006.01) C12M 1/00(2006.01) C12M 1/26(2006.01)C12M 1/42(2006.01) C12N 7/00(2006.01) (54)发明名称 水痘-带状疱疹 减毒活疫苗制备方法和系统 (57)摘要 本发明涉及水痘 ‑带状疱疹减毒活疫苗的制 备方法和系统。 具体地， 本发明提供了一种水痘 ‑ 带状疱疹减毒活疫苗的自动化连续流制备方法， 以及所用的制备系统。 本发明采用一次性连续流 收获方式收获病毒感染细胞后分装入一次性冻 存袋， 采用液氮冷冻系统储存冷冻， 融解系统融 化， 并使用连续流超声破碎获取疫苗原液， 简化 人工操作。 并且， 本发明的制备系统通过全程管 路连接， 全程使用不添加抗生素的培养基， 设备 自动化生产， 大大降低了污染风险， 显著提高了 生产效率。 权利要求书2页 说明书12页 附图1页 CN 115300621 A 2022.11.08 CN 115300621 A 1.一种制备 水痘‑带状疱疹 减毒活疫苗的方法， 其特 征在于， 所述方法包括 步骤： (a)提供水痘病毒毒种感染的病变细胞； (b)使用一次性碗式离心机， 离心收集步骤(a)中的病变细胞， 并将病变细胞存入一次 性冻存袋； (c)利用冷冻系统冷冻一次性冻存袋中的病变细胞， 从而得到冷冻的病变细胞； 其中， 所述冷冻 系统为液氮冷冻； (d)利用融解系统融化 一次性冻存袋中冷冻的病变细胞， 从而获得融化收获液； (e)将步骤(d)中融化收获液和等比例体积的超声缓冲液在超声容器中混匀， 将超声容 器与连续 流超声波破碎仪的进液口连接， 进行 连续流超声， 从而获得超声破碎收获液； 和 (f)将步骤(e)中的超声破碎收获液经滤器过滤后收集， 从而获得水痘 ‑带状疱疹减毒 活疫苗原液； 其中所述滤器与所述连续 流超声破碎仪的出 液口连接 。 2.如权利要求1所述的方法， 其特 征在于， 在步骤(a)中， 还 包括以下子步骤： (a1)以细胞工厂为培 养容器， 培 养宿主细胞； (a2)对宿主细胞 连续传代培 养至30‑40代(较佳地32 代)， 接种水 痘病毒毒种； (a3)培养接种水痘病毒毒种的宿主细胞， 在接种水痘病毒毒种的宿主细胞的细胞病变 达到35％‑65％时， 即获得 水痘病毒毒种感染的病变细胞。 3.如权利要求1所述的方法， 其特征在于， 在步骤(b)中， 使用蠕动泵通过连接细胞工厂 和一次性碗式离心机的给料管将病变细胞悬液收集至一次性碗式离心机的填料碗体中， 收 集病变细胞 悬液的进液流速为15 00ml/min‑2500ml/min。 4.如权利要求1所述的方法， 其特征在于， 在步骤(c)中， 所述冷冻系统的冷冻温度为0 ℃到‑100℃， 预冷时间为0分钟(即不预冷)或10 ‑60分钟， 冷冻时间为20分钟 ‑2小时， 较佳地 1小时； 冷冻保持的温度为 ‑80℃到‑100℃。 5.如权利 要求1所述的方法， 其特征在于， 在步骤(d)中， 所述融解系统的融化温度为40 ℃‑60℃， 融化时间为 40分钟‑2小时， 较佳地1小时。 6.如权利 要求1所述的方法， 其特征在于， 所述方法还包括步骤(g)将步骤(f)中获得的 水痘‑带状疱疹疫苗原液与冻干保护剂混合， 经冻干处理后获得水痘 ‑带状疱疹减毒活疫苗 冻干制剂。 7.如权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述方法全程无菌操作， 且全程使用不添加 抗生素的培 养基。 8.如权利要求1所述的方法， 其特征在于， 所述方法各步骤中使用的各器材通过无菌管 路连接， 从而实现自动化连续 流制备。 9.一种制备 水痘‑带状疱疹 减毒活疫苗的系统， 其特 征在于， 所述系统包括以下模块： (M1)细胞培养和病毒接种模块， 所述模块被配置为培养宿主细胞并接种水痘病毒毒 种， 从而提供 水痘病毒毒种感染的病变细胞； (M2)细胞收集模块， 所述细胞收集模块被配置为使用一次性碗式离心机， 离心收集水 痘病毒毒种感染的病变细胞， 并将病变细胞存 入一次性冻存袋； (M3)冷冻模块， 所述冷冻模块被配置为冷冻一次性冻存袋中的病变细胞， 从而得到冷 冻的病变细胞； (M4)融解模块， 所述融解模块被配置为融化一次性冻存袋中冷冻的病变细胞， 从而获权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115300621 A 2得融化收获液； (M5)连续流超声模块， 所述连续流超声模块被配置为使用连续流超声破碎仪超声破碎 超声容器中的融化收获液， 从而获得超声破碎收获液； (M6)过滤模块， 所述过滤模块被配置为使用滤器将获得的超声破碎收获液过滤， 从而 获得水痘‑带状疱疹疫苗原液。 10.如权利要求9所述的系统， 其特征在于， 所述系统还进一步包括(M7)冻干模块， 所述 冻干模块被配置为将获得 的水痘‑带状疱疹疫苗原液与冻干保护剂混合后进行冻干处理， 从而获得 水痘‑带状疱疹疫苗冻干制剂。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115300621 A 3