(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210974500.X (22)申请日 2022.08.15 (71)申请人 国家食品安全风险评估中心 地址 100022 北京市朝阳区广渠路37号院2 号楼 申请人 北京中检 葆泰生物技 术有限公司 (72)发明人 杨大进　刘龙飞　 (74)专利代理 机构 北京蕙识同联专利代理事务 所(特殊普通 合伙) 11966 专利代理师 赵雪 (51)Int.Cl. C12M 1/34(2006.01) C12M 1/00(2006.01) C12Q 1/06(2006.01) C12Q 1/66(2006.01)G01N 21/64(2006.01) (54)发明名称 一种微生物污染程度的检测方法及设备 (57)摘要 本申请提供一种微生物污染程度的检测方 法及设备， 通过检测样品中ATP的含量来判断微 生物的污染程度， 结果准确， 精密度高， 灵敏度 高。 权利要求书1页 说明书18页 附图2页 CN 115404158 A 2022.11.29 CN 115404158 A 1.一种检测仪， 其特征在于， 所述检测仪包括流体系统、 光电系统、 微孔板承载系统和 软件系统； 所述流体系统由分液系统和注射系统组成； 所述光电系统由光电倍增管和信号 收集器组成。 2.如权利要求1所述的检测仪， 其特征在于， 所述流体系统中采用反 向泵将使用后残留 在管线中的试剂泵回试剂瓶中。 3.如权利要求1或2所述的检测仪， 其特 征在于， 所述 光电倍增管采用百叶窗设计。 4.一种试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒包括ATP降解酶、 ATP降解缓冲液和/或微生物 细胞裂解剂； 可选的， 所述试剂盒还包括植物细胞ATP提取剂； 可选的， 所述试剂盒还包括 发 光反应试剂和发光反应缓冲液； 其中： 所述A TP降解缓冲液中包括Zn2+离子； 或者 所述微生物 细胞裂解剂包括三甲基甘氨酸； 或者所述植物细胞ATP提取剂包括脂肪醇聚氧乙烯聚二甘 油醚。 5.一种用于检测样品微生物污染程度的系统， 其特征在于， 包括权利要求1 ‑3之一所述 的检测仪和/或权利要求 4所述的试剂盒。 6.一种检测ATP含量的方法或鉴定微生物污染程度的方法， 其特征在于， 包括使用权利 要求1‑3之一所述的检测 仪， 或使用权利要求4所述的试剂盒， 和/或使用权利要求5所述的 系统。 7.如权利要求6所述的方法， 其特征在于， 所述方法包括： 样品制备； 通过ATP降解剂降 解游离ATP和 /或植物体细胞ATP； 用微生物细胞裂解剂裂解微生物活细胞以释放出微生物 活细胞内的ATP； 使ATP与荧 光素反应并发光； 通过检测仪捕获 发光信号并反馈结果。 8.如权利要求7所述的方法， 其特征在于， ATP与荧光素反应的发光反应缓冲液中包括 Mg2+、 海藻糖、 BSA和二硫苏糖醇。 9.如权利要求7或8所述的方法， 其特征在于， 所述样品制备包括使样品在适于微生物 生长的温度下保温的步骤。 10.如权利要求6 ‑9之一所述的方法， 其特征在于， 所述方法进一步包括通过检测发光 强度判断微生物的污染程度， 当RLU值小于150时， 结果为阴性； 当RLU值为151 ‑300时， 结果 为疑似阳性； 当RLU值大于 300， 结果为阳性， 表明存在微 生物污染。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115404158 A 2一种微生物污染 程度的检测方 法及设备 技术领域 [0001]本申请涉及一种微 生物污染程度的检测方法及设备， 属于生物化学检测领域。 背景技术 [0002]传统的微生物污染程度的检测方法主要为微生物培养法和pH方法， 其中微生物方 法操作复杂， 劳动强度大， 对操作人员的技术水平要求高， 检测速度 慢、 通常需要 7‑19天， 需 要无菌操作环境； pH方法主要通过检测样品中pH的变化来判断微生物污染程度， 通常需要 5‑14天， 需要无菌操作环 境， 另外并非所有微生物的生长繁殖都会改变pH， 因此pH方法易出 现假阴性结果。 由于这些检测方法检测速度较慢， 可适用于保质期较长的罐头类食品的检 测， 而乳制品等自动化 程度较高且保质期较短的食品则不 适用这样的检测方法。 [0003]ATP是一种能量分子， 普遍存在于有机体中， ATP含量与微生物活细胞数量成一定 正比关系。 因此， 通过检测样品中ATP的含量判断微生物的污染程度是一种非常有市场前景 的、 快速检测样品中微生物污染的方法。 这种 方法的步骤大体包括： 首先通过ATP降解剂去 除微生物细胞外的游离ATP(若是植物源性食品， 要先提取植物体细胞ATP)； 再酶解游离ATP 和/或植物体细胞ATP； 然后裂解微生物活细胞以释放出微生物活细胞内的ATP； 再后在荧光 素酶的存在下， ATP可与荧光素快速反应并发光； 最后通过检测 仪捕获ATP发光反应的发光 信号并报告结果。 这种方法存在的问题是： ATP降解 酶在反应中活力不 足， 游离ATP去除不完 全， 微生物细胞裂解不充分， 缺乏优质的反应体系， 同一套检测方法对不同的样品难以均获 得准确度、 精密度、 灵敏度俱佳的检测结果 等。 发明内容 [0004]为了解决上述技术问题， 发明人联合多家 科研单位共同研发， 将整套ATP检测方法 流程中的每个环节拆分开来， 逐一进 行改良， 分工协作， 最 终摸索出了一套高效的微生物污 染程度检测系统， 包括试剂盒、 检测方法及设备。 [0005]本申请提供一种检测仪， 包括流体系统、 光电系统、 微孔板承载系统和软件系统； 所述流体系统由分液系统和注射系统组成； 所述光电系统由高灵敏的光电倍增管和信号收 集器组成。 [0006]在一些实施方式中， 流体系统中采用反向泵将使用后残留在管线中的试剂泵回试 剂瓶中。 [0007]在一些实施方式 中， 光电倍增管采用百叶窗设计。 [0008]本申请还提供一种试剂盒， 其特征在于， 所述试剂盒包括ATP降解酶、 ATP降解缓冲 液和/或微生物细胞裂解剂； 可选的， 所述试剂盒还包括植物细胞ATP提取剂； 可选的， 所述 试剂盒还包括发光反应试剂和发光反应缓冲液； 其中： 所述ATP降解缓冲液中包括Zn2+离 子； 或者所述微生物细胞裂解剂包括三甲基甘氨酸； 或者所述植物细胞ATP提取剂包括脂肪 醇聚氧乙烯聚二甘油醚。 [0009]本申请还提供一种用于检测样品微生物污染程度的系统， 其特征在于， 包括上述说　明　书 1/18 页 3 CN 115404158 A 3