(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210977860.5 (22)申请日 2022.08.16 (71)申请人 潍坊易北特健康食品有限公司 地址 261000 山东省潍坊市经济开发区月 河路3177号高新技术产业园孵化器2 楼212房间 (72)发明人 向沙沙　张亚林　朱乘风　苏晓明　 石丽华　王鑫洋　沈宇标　朱炫　 陈杰　 (74)专利代理 机构 潍坊领潮知识产权代理有限 公司 37376 专利代理师 李晶 (51)Int.Cl. C12M 1/02(2006.01) C12M 1/08(2006.01)C12M 1/38(2006.01) C12M 1/36(2006.01) C12M 1/00(2006.01) A61B 5/00(2006.01) (54)发明名称 一种高脂饮食下的高胆汁酸肠型模拟方法 及装置 (57)摘要 一种高脂饮食下的高胆汁酸肠型模拟方法 及装置， 涉及医学模拟实验技术领域。 包括至少 一个发酵罐和一个补料罐， 发酵罐上设有便于稳 定培养液pH值的输入酸液或碱液的输液管、 输料 管、 输入惰性气体的输气管和搅拌装置， 补料罐 通过补料管与发酵罐的输料管连通， 发酵罐上设 有发酵后废液的输出管路， 上述各个管路上设置 了蠕动泵， 补料罐和所述发酵罐上设有调节培养 液温度的调温装置。 通过构建高脂饮食 下的高胆 汁酸的肠道菌群的体外模型， 从而实现了体外高 脂饮食下的高胆汁 酸肠型模拟。 权利要求书1页 说明书5页 附图2页 CN 115232712 A 2022.10.25 CN 115232712 A 1.一种高脂饮食下的高胆汁酸肠型模拟装置， 其特征在于， 包括至少一个发酵罐和一 个补料罐， 所述 发酵罐上设有输入酸液或碱液的输液管、 加料用的输料管、 输入惰性气 体的 输气管和搅拌装置， 所述补料罐通过补料管与所述发酵罐 的输料管连通， 所述发酵罐上设 有发酵后废液 的输出管路， 上述各个管路上设置了蠕动泵， 所述补料罐和所述发酵罐上设 有调节培 养液温度的调温装置 。 2.一种利用权利要求1所述的高脂饮食下的高胆汁酸肠型模拟装置进行高脂饮食下的 高胆汁酸肠型模拟的方法， 其特 征在于， 包括以下步骤： 制备微生物菌液； 配置高胆汁 酸培养液； 搭建体外模拟系统： 1） 将步骤 （2） 中制得的高胆汁酸培养液加入发酵罐和补料罐中， 并 调节发酵罐的pH值； 2） 将步骤 （1） 制得的微生物菌液接种入步骤1） 中的发酵罐中， 并进行搅 拌； 3） 接种24H以后， 每日由补料罐向发酵罐补给部分高胆汁酸培养液， 并从发酵罐中排出 等量的废液； 4） 向发酵罐中通氮气以排尽发酵罐内的空气， 直至各个发酵罐内的微生物趋 于稳定； 5） 向补料罐中加入要评价的样 品， 重复步骤3） 连续7天后停止发酵； 6） 采集发酵罐 中的发酵 液， 提取DNA经16S  rRNA测序测定 菌群组成。 3.根据权利要求2所述的一种高脂饮食下的高胆汁酸肠型模拟方法， 其特征在于， 步骤 （1） 中所述的制备微生物菌液包括以下步骤： 收集五位以上健康青年的粪便作为本实验肠 道菌群的来源， 粪便与无菌PBS缓冲液以一定的比例混合， 充分搅拌悬浮后， 用无菌纱布过 滤掉固体颗粒， 立即通入氮气以除去液体中的氧气， 并置 于厌氧环境中。 4.根据权利要求3所述的一种高脂饮食下的高胆汁酸肠型模拟方法， 其特征在于， 所述 粪便与所述无菌PBS缓冲液的混合比例为1： 8。 5.根据权利要求2所述的一种高脂饮食下的高胆汁酸肠型模拟方法， 其特征在于， 步骤 （2） 中配置高胆汁 酸培养液包括以下步骤： 基础培养液配制： 将玉米淀粉、 蛋白胨、 酵母提取物、 胰蛋白胨、 黏液素、 L ‑半胱氨酸盐 酸盐、 血红素、 氯化钠、 吐温、 氯化钾、 磷酸二氢钾、 六水氯化镁、 六水氯化钙和微量元素储 备 液的各组分进行混合配制得基础培 养液， 然后杀菌； 将5~20份脂肪混合物与0.6~1份胆盐三号， 加入到10份无菌水中， 在37℃条件下经过均 质成乳糜微粒， 加入到步骤1） 制得的基础培 养液中， 得到高胆汁 酸培养液。 6.根据权利要求5所述的一种高脂饮食下的高胆汁酸肠型模拟方法， 其特征在于， 所述 微量元素储备液包括七水硫酸镁、 七 水硫酸亚铁、 二水氯化钙、 四水氯化锰、 七水硫酸钴、 五 水硫酸铜、 七水硫酸锌、 六 水氯化镍 。 7.根据权利要求5所述的一种高脂饮食下的高胆汁酸肠型模拟方法， 其特征在于， 所述 脂肪混合物包括磷脂和胆固醇。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115232712 A 2一种高脂饮食下的高胆汁酸肠型模拟方 法及装置 技术领域 [0001]本发明涉及医学模拟实验技术领域， 特别涉及一种高脂饮食下的高胆汁酸肠型模 拟方法及装置 。 背景技术 [0002]胆汁酸是胆汁的主要成分， 是以胆固醇为原料在肝脏中合成的一类胆烷酸的总 称。 胆汁酸是脂肪和脂溶性 维生素消化、 吸收的重要物质， 大部 分胆汁酸可经过肝肠循环代 谢进行回收， 小部分随粪便排出。 但是近年来， 随着生活水平的提高， 高脂肪饮食显著提高 了胆汁酸的分泌量， 陈红在 《高分辩质谱法检测小鼠粪便胆汁酸代谢轮廓的方法学研究及 应用》 中检测小鼠经过低脂和高脂饮食喂养， 小鼠小肠和粪便中的总胆汁酸水平增高了1.5 ~2.5倍。 胆汁酸分泌增多， 一方面增加了脂肪的消化与吸收， 从而导致肥胖、 高血压、 心血管 等疾病； 一方面胆汁酸和脂肪进入到了结肠， 形成了一种高胆汁酸肠道环境， 改变了肠道菌 群。 朱宏斌在 《宏基因组研究高脂饮食诱导小鼠的肥胖易 感性与肠道菌群的关系》 中显示了 高脂饮食下， 在菌属层面， 耐胆汁细菌嗜胆菌属 （Bilophila） 、 别样杆菌属 （Ali stipes） 细菌 是高胆汁酸下的标志性细菌。 肠道菌群作为机体的一种重要 “器官”， 对宿主的健康至关重 要， 肠道菌群通过去结合和去羟基化反应在胆汁酸代谢中起着重要作用， 肠道菌群的改变 可导致宿主胆汁酸代谢轮廓发生变化， 影响机体的健康。 因此饮食中胆固醇在肠道中的吸 收， 在血液循环中的交换转 运以及在细胞中合成与代谢均可影响肝脏 脂质代谢。 [0003]现有的高脂饮食下的高胆汁酸的肠道菌群模型都是体内模型， 体外模型尚处于空 白。 同时体内模 型存在着伦理、 个体差异大、 周期 长、 操作复杂， 耗费大等问题， 不利于饮食、 药物的快速筛选。 传统的体外胃肠道消化系统， 存在低胆汁酸或不添加胆汁酸的问题， 不能 很好地模拟人体释放胆汁酸的环 境， 不适合作为以bilophila为标记物的筛选模 型。 因此建 立一个高脂肪饮食状态下 的高胆汁酸肠型， 用于模拟 高脂饮食下对干预饮食、 药物筛选和 探究， 对开发预防和缓解高脂饮食下疾病的新型食品、 药物具有重要意 义。 发明内容 [0004]针对以上缺陷， 本发明的目的是提供一种高脂饮食下的高胆汁酸肠型模拟 方法及 装置， 此高脂饮食下的高胆汁酸肠型模拟方法及装置利用高胆汁酸乳化结合脂肪体系解决 了高脂饮食下的高胆汁酸肠型环境问题， 通过构建高脂饮食下的高胆汁酸的肠道菌群的体 外模型， 从而实现了体外高脂饮食下的高胆汁 酸肠型的模拟。 [0005]为了实现上述目的， 本发明的技 术方案是： 一种高脂饮食下的高胆汁酸肠型模拟装置， 包括至少一个发酵罐和一个补料罐， 所述发酵罐上设有输入酸液或碱液 的输液管、 加料用的输料管、 输入惰性气体的输气管和 搅拌装置， 所述补料罐通过补料管与所述发酵罐 的输料管连通， 所述发酵罐上设有发酵后 废液的输出管路， 上述各个管路上设置了蠕动泵， 所述补料罐和所述发酵罐上设有调节培 养液温度的调温装置 。说　明　书 1/5 页 3 CN 115232712 A 3