(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202211204214.1 (22)申请日 2022.09.29 (71)申请人 复旦大学附属中山医院 地址 200032 上海市徐汇区枫林路180号 (72)发明人 黄浙勇　宋亚楠　李琦玉　钱菊英　 葛均波　 (74)专利代理 机构 上海科盛知识产权代理有限 公司 312 25 专利代理师 褚明伟 (51)Int.Cl. C12N 5/0775(2010.01) C12N 5/078(2010.01) A61K 35/28(2015.01) A61K 47/46(2006.01) A61K 47/69(2017.01)A61P 9/10(2006.01) A61P 29/00(2006.01) (54)发明名称 一种血小板膜修饰的外泌体及其制备方法 与应用 (57)摘要 本发明涉及一种血小板膜修饰的外泌体及 其制备方法与应用。 本发明具体涉及一种血小板 膜修饰的外泌体可以模拟血小板的归巢能力， 靶 向到局部斑块， 被巨噬细胞吞噬， 从而传递活性 物质到靶细胞， 调节巨噬细胞炎症水平。 同时可 以作为载体， 包载蛋白、 RNA和DNA等靶向局部斑 块巨噬细胞。 本发明显著提高血小板膜修饰的外 泌体在斑块处巨噬细胞内的分布， 提高血小板膜 修饰的外泌体对与斑块局部炎症的调节作用， 为 治疗动脉粥样硬化 提供新的抗炎药物。 权利要求书1页 说明书9页 附图8页 CN 115491350 A 2022.12.20 CN 115491350 A 1.一种外泌体， 其特 征在于， 所述外泌体是 血小板膜修饰的外泌体。 2.一种如权利要求1所述外泌体的制备方法， 其特征在于， 通过挤压器连续挤压 融合血 小板膜和外泌体得到血小板膜修饰的外泌体。 3.根据权利要求2所述的一种外泌体的制备方法， 其特征在于， 所述的血小板膜来自 C57BL/6小鼠外周血的血小板 。 4.根据权利要求2所述的一种外泌体的制备方法， 其特征在于， 所述的外泌体来自 C57BL/6小鼠间充质干细胞 上清。 5.一种如权利要求1所述外泌体的应用， 其特征在于， 所述外泌体在制备治疗动脉粥样 硬化的药物中的应用。 6.根据权利要求5所述的一种外泌体的应用， 其特征在于， 所述外泌体在制备局部抗炎 的药物中的应用。 7.根据权利要求6所述的一种外泌体的应用， 其特征在于， 所述外泌体作为递送载体的 应用。 8.根据权利要求7所述的一种外泌体的应用， 其特征在于， 所述外泌体作为递送载体， 递送蛋白、 DNA、 RNA或药物的应用。 9.一种药物递送系统， 其特征在于， 包括权利要求1所述的外泌体， 以及在血小板膜修 饰的外泌体上负载的蛋白、 DNA、 RNA或药物。 10.根据权利要求9所述的一种药物递送系统， 其特征在于， 通过电穿孔方式将蛋白、 DNA、 RNA或者药物装载到血小板膜修饰的外泌体中。权　利　要　求　书 1/1 页 2 CN 115491350 A 2一种血小板膜修饰的外泌体及其制备方 法与应用 技术领域 [0001]本发明属于生物技术领域， 尤其是涉及一种血小板膜修饰的外泌体及 其制备方法 与应用。 背景技术 [0002]动脉粥样硬化是心血管疾病(cardiovascular  disease,CVD)的主要病因。 现如 今， 动脉粥样硬化性心血管疾病(at herosclerosis cardiovascu lar disease,ASCVD)仍是 世界范围内死亡 的主要原因之一， 其治疗方式以降血脂为金标准。 动脉粥样硬化是一种慢 性炎症性疾病， 且基于 近来大量临床试验的结果， 抗炎治疗有望成为ASCVD新的治疗 靶点。 [0003]2017年CANTOS研究首次肯定了动脉粥样硬化的炎症假说， 证实了IL ‑1β 抗体可以 显著降低患者心梗后心血管事件的发生风险(Weber,C.,and  von Hundelshausen, P .CANTOS  Trial Validates  the Inflammatory  Pathogenesis  of  Atherosclerosi s.Circ Res,2017,121(10):1119 ‑21.)。 COLCOT和LoDoCo2试验研究证明了 秋水仙碱可以减少心肌梗死及慢性稳定性冠心病患者的主要心血管事件风险(Nidorf, S.M.,et al.,Colchicine  in Patients  with Chronic Coronary  Disease.N  Engl JMed, 2020.383(19):1838 ‑1847； Tardif,J. ‑C.,et al.,Efficacy  and Safety of Low‑Dose  Colchicine  after Myocardial  Infarction.N Engl J Med,2019.381(26):2497 ‑2505.)。 系列研究表明炎症是独立于LDL ‑C的ASCVD重要危险因素， 控制炎症可以减少ASCVD的发生， 这些为ASCVD的抗炎靶点提供了新的证据。 尽管如此， 抗炎药物由于不具有特异性分布， 常 常导致系统性的免疫抑制， 诱发严重感染等副作用。 因此， 针对局部斑块的给药方式， 旨在 有效减轻斑块炎症却不影响全身免疫反应则尤为重要。 [0004]动脉粥样硬化的典型病理特征是内皮受损、 脂质沉积和炎症细胞浸润。 血管内皮 的受损导致其分泌大量黏附分子介导白细胞在斑块局部募集， 其中， 巨噬细胞是斑块处 白 细胞的主要成分。 迁移到内膜处的巨噬细胞受到局部微环境刺激分泌炎症因子、 活性氧自 由基加剧氧化应激。 源源不断的脂蛋白 ‑胆固醇被巨噬细胞吞噬， 逐渐发展成泡沫细胞， 进 一步诱发了慢性炎症。 由此可见， 巨噬细胞在斑块炎症反应中发挥了重要作用， 特异性地针 对巨噬细胞递送抗炎药物或将有效阻止AS进 展并消退斑块。 [0005]据报道， 间充质干细胞(Mesench ymal stem cell,MSC)在治疗AS中具有重要价值， 可以减少内皮功能障碍、 调节巨噬细胞功能和抑制泡沫细胞形成(Li,F.,X.Guo,and  S.‑ Y.Chen,Function  and Therapeutic  Potential  of Mesenchymal  Stem Cells in  Atherosclerosis.Front  Cardiovasc  Med,2017.4(32))。 近年来， 人们发现MSC发挥功能主 要依赖于 分泌的外泌体。 这是一种干细胞分泌的膜样细胞外囊泡， 浓缩了MS C的大量活性物 质， 因此既继承了MSC的功能作用， 又避免了细胞治疗导致的致瘤性、 栓塞、 存活率低等问 题。 截止2022年6月， 全球最大的临床试验数据库Clinical  Trial中注册的外泌体临床研究 已逾180项。 基于此， 间充质干细胞外泌体(MSC ‑Exo)可能较MSC本身在AS治疗中更具有应用 前景。 然而， 外泌体在体内的半衰期短， 易被肝脾网状内皮系统清除， 且靶向性不 足， 往往仅说　明　书 1/9 页 3 CN 115491350 A 3