ICS. 67.050 B 50 SC 中华人民共和国水产行业标准 SC/T 3024-2004 生物法 腹泻性贝类毒素的测定 Determination of diarrhoea shellfish poison Bioassay 行业标准信息服务平台 2004-01-07发布 2004-03-01实施 中华人民共和国农业部 发布 SC/T 3024—2004 前言 本标准参考了日本厚生省推荐使用的腹泻性贝类毒素的测定方法。 本标准的附录 A为资料性附录。 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准起草单位：国家水产品质量监督检验中心、中国水产科学研究院东海水产研究所。 本标准主要起草人：王联珠、袁骐、李晓川、冷凯良、陈亚瞿、蒋玫。 行业标准信息服务平台 I SC/T 3024—2004 腹泻性贝类毒素的测定 生物法 1范围 本标准规定了腹泻性贝类毒素（DSP）的测定方法一一生物法。 本标准适用于软体动物贝类可食部分中腹泻性贝类毒素（DSP）的测定。 2原理 用丙酮提取贝类中毒素，再转移至乙醚中，经减压浓缩蒸干后，再以1%吐温-60生理盐水溶解 残留物，注射小鼠，观察存活情况，计算其毒力。 3试剂和材料 3.1丙酮（分析纯)。 3.2乙醚（分析纯)。 3.31%吐温-60生理盐水：称取1.0g吐温-60，溶于生理盐水（0.8%NaCI）中，并定容至100.0 mL. 4仪器和设备 4.1旋转蒸发器。 4.2均质器。 4.3磨口烧瓶：圆底，500mL、100mL。 4.4布氏漏斗：Φ100mm。 4.5分液漏斗：具塞，500mL。 4.6天平：感量0.1g。 4.7刻度试管：10mL，具塞。 4.8 冰箱：0℃～5℃和-15℃～-20℃。 4.9注射器：1 mL。 4.10注射器针头：8#。 4.11小鼠：体重为16 g～20g的健康ICR系雄性小鼠。 5检样的制备 5.1生鲜带壳的贝类 a）用清水彻底洗净贝类外壳，开壳，用清水淋洗内部去除泥沙及其他外来杂质，仔细取出贝肉， 切勿割破肉体； b）收集贝肉，沥水5min，捡出碎壳等杂物，迅速冷冻，贮藏备用； c）注意不要破坏闭壳肌以外的组织，尤其是中肠腺（又称消化盲囊，组织呈暗绿色或褐绿色）。 开壳前不能加热或用麻醉剂。 5.2冷冻贝类 在室温下，使冷冻的样品（带壳或去壳的）呈半冷冻状态，按5.1方法清洗、开壳、淋洗、 1 SC/T 3024—2004 取肉。 5.3取样 a）可以切取中肠腺的贝类（扇贝、贻贝、牡蛎等），称取200g贝肉后，仔细切取全部中肠腺， 将中肠腺称重后细切混合作为检样，注意不要使中肠内容物污染案板； b）对于尚未确定部位毒性的贝类及不易切取中肠腺的小型贝肉，可将全部贝肉细切、混合，作 为检样； c）为避免毒素的危害，应戴手套进行检验操作，移液管等用过的器材应在5%的次氯酸钠 溶液中浸泡1h以上，以使毒素分解；废弃的提取液等也应用5%的次氯酸钠溶液处 理。 6提取 6.1取5.3a）处理的中肠腺，或5.3b）处理的200g贝肉置于均质杯内，均质2min。 6.2加3倍量丙酮，与样品充分搅拌均匀后，用布氏漏斗抽滤并收集提取液。对残渣以检样两倍量 丙酮再次抽滤两次，合并抽滤液。 6.3将抽提液移入500mL的磨口烧瓶中，减压浓缩（旋转蒸发器，56℃）去除丙酮，直至在液体 表面分离出油状物。 6.4将浓缩液移入分液漏斗内，以100mL～200mL乙醚和少量的水洗下粘壁部分，轻轻振荡（不 能生成乳浊液），静置分层后，去除水层（下层），用相当乙醚半量的蒸馏水洗乙醚层两次，再将乙醚 层移入250mL的磨口烧瓶中，减压浓缩（旋转蒸发器，35℃）去除乙醚。 6.5以少量乙醚将浓缩物移人100mL磨口烧瓶中，再次减压浓缩去除乙醚。 6.6以1%吐温-60生理盐水将全部浓缩物在刻度试管中稀释到10mL。此时1mL试液相当于20g 去壳贝肉的重量，以此悬浮液作为试验原液。 6.7以试验原液注射小鼠，24h内3只均死亡时，需将试验原液进一步稀释，再注射小鼠。稀释前， 应先振荡使溶液成均匀悬浮液，再取部分试液以1%吐温-60生理盐水稀释。 7小鼠试验 7.1以振荡器使试液或其稀释液成为均匀的悬浮液。 7.2将每只小鼠称重，每三只小鼠为一组，分别将1mL试液注射到小鼠腹腔中。 7.3同时，另取三只小鼠作为对照组，注射1mL1%吐温-60生理盐水于腹腔中。 7.4观察自注射开始到24h后的小鼠存活情况，求出一组三只中死亡两只及两只以上的最小注 射量。 7.5小鼠注射腹泻性贝毒后的症状为运动不活泼，大多呼吸异常，致死时间长。 8结果计算和表述 行业 8.1毒力的计算 使体重16g～20 g的小鼠在24 h死亡的毒力为1个小鼠单位（MU)。 样品中DSP毒力的计算，按表1选择24h内死亡两只及两只以上鼠的最小注射量及最大稀释倍 数进行计算。 8.2注射量与毒力的关系 注射量与毒力的关系见表1。 2 SC/T 3024—2004 注射量与毒力的关系 表1 注射量 检样量a 毒力 试验液 mL MU/g 1.0 20 原液 0.05 原液 0.5 10 0.1 10 0.1 2倍稀释液 1.0 2倍稀释液 0.5 0.2 5 4倍稀释液 1.0 5 0.2 4倍稀释液 0.5 2.5 0.4 8倍稀释液 1.0 2.5 0.4 8倍稀释液 0.5 1.25 0.8 16倍稀释液 1.25 0.8 1.0 16倍稀释液 0.5 0.625 1.6 以中肠腺为检样时，相当于含有中肠腺的去壳贝肉量。 行业标准信息服务平 3 SC/T 3024—2004 SC/T 3024—2004 附录A 资料性附录） 本标准与日本厚生省标准的技术差异及原因 表A.1为本标准与日本厚生省标准的技术差异及原因一览表。 表A.1本标准与日本厚生省标准的技术差异及原因 本标准的章条 技术性差异 原因 封面、前言、标准的全文 原方法标准的格式与此完全不同 标准格式采用GB/T1.1—2000的规定 文字叙述中有部分改动，将原文中的大段文字 按GB/T1.1—2000的要求，将标准条文细化， 5章~9章 修改为逐条叙述 使其更有逻辑性、更有条理，使用便捷 原标准为“必要时，对试验溶液可做进一步稀 释”，现改为“以试验原液注射鼠时，24h内3 更清楚说明需要稀释时的情况，便于试验时的操 6.7 只均死亡时，需将试验原液进一步稀释，再注射 作 鼠” 行业标准信息服务平台 SC/T 3024—2004 SC/T 3024—2004 附录A 资料性附录） 本标准与日本厚生省标准的技术差异及原因 表A.1为本标准与日本厚生省标准的技术差异及原因一览表。 表A.1本标准与日本厚生省标准的技术差异及原因 本标准的章条 技术性差异 原因 封面、前言、标准的全文 原方法标准的格式与此完全不同 标准格式采用GB/T1.1—2000的规定 文字叙述中有部分改动，将原文中的大段文字 按GB/T1.1—2000的要求，将标准条文细化， 5章~9章 修改为逐条叙述 使其更有逻辑性、更有条理，使用便捷 原标准为“必要时，对试验溶液可做进一步稀 释”，现改为“以试验原液注射鼠时，24h内3 更清楚说明需要稀释时的情况，便于试验时的操 6.7 只均死亡时，需将试验原液进一步稀释，再注射 作 鼠” 行业标准信息服务平台