ICS 67.050 B 50 SC 中华人民共和国水产行业标准 SC/T 3041-2008 水产品中苯并（a）芘的测定 高效液相色谱法 Determination of benzo(a)pyrene in aquatic products High performance liquid chromatography 行业标准信息服务平台 2008-08-07 发布 2008-08-07实施 中华人民共和国农业部 发布 SC/T 3041-2008 前言 本标准的附录 A为资料性附录。 本标准由中华人民共和国农业部渔业局提出。 本标准由全国水产标准化技术委员会水产品加工分技术委员会归口。 本标准起草单位：中国水产科学研究院南海水产研究所。 本标准主要起草人：杨贤庆、陈胜军、李来好、岑剑伟、郝淑贤、戚勃、马海霞。 行业标准信息服务平台 SC/T 3041—2008 水产品中苯并（a）芪的测定 高效液相色谱法 1范围 本标准规定了水产品中苯并(a)芪的高效液相色谱测定方法。 本标准适用于水产品及水产加工品中苯并(a)芘的测定。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 SC/T3016水产品抽样方法 3方法原理 试样经氢氧化钾皂化后用正已烷提取，通过固相柱净化，用正已烷二氯甲烷溶液洗脱，旋转蒸发器 蒸干，残渣用乙腈溶解，经反相色谱柱分离，荧光检测器检测，外标法定量。 4试剂 除特别说明外，所用试剂均为分析纯。 4.1水：符合GB/T6682一级水的要求。 4.2乙腈：色谱纯。 4.3甲醇。 4.4正已烷。 4.5二氯甲烷。 4.6无水硫酸钠：650℃下灼烧4h，冷却至室温，贮存于干燥器中备用。 4.7固相萃取柱：佛罗里柱（Florisil)，250mg，3mL，使用前活化。 4.850%氢氧化钾溶液：称取50.0g氢氧化钾加适量蒸馏水溶解，冷却后，用蒸馏水稀释定容至100 mL,摇匀即可。 4.9正已烷二氯甲烷溶液：将2mL二氯甲烷加人到6mL正已烷溶液中。 4.10苯并（a)芘标准品：纯度≥98.0%。 4.11标准贮备液：准确称取苯并(a)芘标准品0.0100g，置于100mL容量瓶中，加乙腈定容至刻度， 该贮备液浓度为100μg/mL。置4℃冰箱中密封保存（保存时间不超过3个月）。 4.12标准工作液：准确吸取1.00mL的标准贮备液，置于100mL容量瓶中，用乙稀释至刻度。分 别准确吸取一定体积的该溶液，制成浓度为0.5ng/mL、5.0ng/mL、10.0ng/mL、50.0ng/mL、100.0 ng/mL、150.0 ng/mL、200.0 ng/mL的标准工作液。 5仪器设备 5.1高效液相色谱仪：配荧光检测器。 1 SC/T 3041—2008 5.2离心机：5000r/min。 5.3超声波震荡器。 5.4旋转蒸发器。 5.5旋涡振荡器。 5.6分析天平：感量0.01g和0.0001g。 5.7氮吹仪。 5.8高速组织捣碎机。 5.9无水硫酸钠柱：砂芯玻璃层析柱中装无水硫酸钠25g。 5.10固相萃取装置。 5.11圆底烧瓶：50mL和100mL。 5.12 试管:10mL。 5.13聚丙烯离心管：100mL。 5.14微孔过滤膜：孔径0.45μm。 6测定步骤 6.1试样制备 6.1.1鲜活水产品的试样制备：按SC/T3016的规定执行。 6.1.2水产加工品的试样制备：抽取至少3个包装件，取试样200g绞碎混合均匀后分为两份，一份用 于检验，另一份作为留样。 6.2提取 （4.8)10mL，在60℃水浴中浸提30min，不时振摇。然后再超声振荡10min，转移至100mL聚丙烯离 心管中，加人20mL正已烷，旋涡混匀5min，4000r/min离心10min分层，取上层正已烷相经无水硫 酸钠柱滤入100mL圆底烧瓶中，再用15mL正已烷按上述操作重复提取水相一次。将提取液在50℃ 水浴中旋转蒸发，当圆底烧瓶中剩下约1mL液体时，取下圆底烧瓶，将液体移入试管中，再加人2mL 正已烷清洗，合并到试管中，重复清洗一次，收集的液体留过柱用。 6.3净化 先使用3mL二氯甲烷、5mL正已烷活化固相萃取柱（4.7），流速约为2mL/min。将提取液用10 mL正已烷洗人柱子中，再用8mL的正已烷二氯甲烷溶液（4.9)洗脱，用50mL圆底烧瓶收集洗脱液。 人2mL正已烷清洗圆底烧瓶2次，合并至试管中，氮气吹干，准确加入1.00mL乙腈，超声溶解后，用 0.45μm的微孔滤膜过滤，供高效液相色谱仪测定。 6.4试样测定 6.4.1色谱条件 6.4.1.1色谱柱：反相C18,250mm×4.6mm，粒度5um;或与之相当的色谱柱。 6.4.1.2流动相：乙腈十水（75十25)。 6.4.1.3流速：1.0mL/min。 6.4.1.4柱温：35℃。 6.4.1.5检测器波长：激发波长297nm，发射波长405nm。 6.4.1.6进样量：20μL。 2 SC/T 3041—2008 6.4.2色谱分析：分别取标准工作液（4.12)和试样提取液于液相色谱仪中，按上述色谱条件进行色谱 分析，记录分析结果，响应值均应在仪器检测的线性范围之内，根据标准品的保留时间定性，外标法定 量。标准品色谱图参见附录A。 6.5空白试验 不加试样，在相同试验条件下，与试样测定的同批进行空白试验。 7 计算 试样中苯并(a)芘的含量按式(1)计算。计算结果需扣除空白值。结果保留3位有效数字。 C×V×1 000 5=X (1) u 式中: X—试样中苯并(a)芘的含量,单位为微克每千克(μg/kg); 一试样中苯并(a)芪的含量，单位为微克每毫升(μug/mL)； C- 一试样质量，单位为克(g)； m- V一试样定容的体积,单位为毫升(mL)。 8方法灵敏度、准确度和精密度 8.1灵敏度 本方法最低检出限为0.1μg/kg，最低定量限为0.5μg/kg。 8.2准确度 本方法添加浓度为0.5μg/kg～40μg/kg时，回收率为75%～110%。 8.3精密度 本方法批内和批间的相对标准偏差<15%。 行业标准信息服务平台 3 SC/T 3041—2008 附录A (资料性附录) 苯并(a)芪液相色谱图 A.1浓度为5mg/L苯并(a)芘的标准液相色谱图见图A.1。 26.816 En 1.8 1.6 1.4 1.2 1 0.8 0.6 0.4 5 15 20 min 0 10 25 图 A.1浓度为5μg/L苯并(a)芪的标准液相色谱图 A.2试样空白色谱图见图A.2。 LU 1.8 1.6 1.4 1.2 1 0.8 9°0 5 10 15 20 25 min 图 A. 2 2试样空白色谱图 4 SC/T 3041—2008 试样中苯并(a)芘色谱图见图A.3。 A.3 nT 3.5 26.716 31 2.5 2 1.5 0.5 25 min 5 10 15 20 0 图 A.3 试样中苯并(a)芪色谱图 行业标准信息服务平 5