ICS 65.120 CCS B 46 湖 43 南 省 地 方 标 准 DB43/T 2347—2022 饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇快速检测 超导量点免疫荧光法 Detection of deoxynivalenol in feed Rapid quantitative method of superconducting dots immunofluorescence technique 2022 - 05 - 06 发布 2022 - 08 - 06 实施 湖南省市场监督管理局 发 布 DB43/T 2347—2022 目 次 前言························································································································ Ⅲ 1 范围 ····················································································································· 1 2 规范性引用文件 ······································································································ 1 3 术语和定义 ············································································································ 1 4 原理 ····················································································································· 1 5 试剂与材料 ············································································································ 1 6 仪器与设备 ············································································································ 1 7 样品制备 ··············································································································· 2 8 样品测定 ··············································································································· 2 9 注意事项 ··············································································································· 2 10 结果表述·············································································································· 2 11 重复性················································································································· 3 附录 A（规范性） 超导量点免疫荧光快速定量检测卡性能要求及评价 ··································· 4 I DB43/T 2347—2022 II DB43/T 2347—2022 前 言 本文件按照 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则》的规 定起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由湖南省农业农村厅提出。 本文件由湖南省农业标准化技术委员会归口。 本文件起草单位：湖南省饲料工业协会、湖南普菲克生物科技有限公司、湖南省兽药饲料监察所、 湖南喜来高动物保健品有限公司、湖南绿亨世源动物药业有限公司、湖南中科基因技术有限公司。 本文件主要起草人：黄勇、李艳平、李裕、周宇骏、张敏、刘亚力、胡春灿、苗超、邹建曾、 蒋岳华。 III DB43/T 2347—2022 IV DB43/T 2347—2022 饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇快速检测 1 超导量点免疫荧光法 范围 本文件规定了饲料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的超导量点免疫荧光快速定量检测方法。 本文件适用于植物性饲料原料、配合饲料、浓缩饲料、精料补充料中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的快速检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14699.1 饲料 采样 GB/T 20195 动物饲料 试样的制备 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 原理 本方法基于超导量点标记的抗原抗体反应，采用荧光侧向免疫层析原理。试样提取液中的脱氧雪腐 镰刀菌烯醇与检测卡上标记的抗体相结合并发出荧光，荧光强度与试样中脱氧雪腐镰刀菌烯醇含量相 关。层析结束后，用免疫荧光分析仪测定检测卡上的检测线和控制线的荧光强度，仪器根据内置标准曲 线自动算出试样中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的含量。 5 试剂与材料 5.1 试剂均为分析纯，实验室用水应符合 GB/T 6682 中三级水的要求。 5.2 稀释缓冲液：使用超导量点免疫荧光定量检测卡配套的稀释缓冲液，或根据产品使用说明书配制。 5.3 提取液：三级水。 5.4 检测卡：性能指标应符合附录 A 要求。 5.5 滤纸：采用中速定量滤纸。 6 仪器与设备 6.1 天平：感量 0.01 g。 6.2 小型粉碎机。 1 DB43/T 2347—2022 6.3 分子筛：20 目。 6.4 离心机：转速≥4000 r/min。 6.5 涡旋振荡器。 6.6 免疫荧光分析仪：可测定并显示检测卡的测定结果。 6.7 计时器。 7 样品制备 7.1 采样 按 GB/T 14699.1 的规定执行。 7.2 样品处理 7.2.1 取有代表性的样品约 500 g，用小型粉碎机粉碎至全部通过 20 目分析筛，混合应均匀。 7.2.2 称取 5 g（精确至 0.01 g）试样于 50 mL 离心管中，加入 25.0 mL 提取液，用涡旋振荡器振荡 5 min；静置后用滤纸过滤，或取 1.0 mL～1.5 mL 混合液于离心管中，经离心机以 4000 r/min 离心 3～ 5 min。取滤液或离心后的上清液 100 μL 于另一离心管中，加入 100μL 三级水混匀，再加入 200μL 稀释缓冲液，充分混匀待测。 8 样品测定 8.1 开启免疫荧光分析仪。 8.2 将超导量点免疫荧光定量检测卡取出，加样孔朝上平放。 8.3 准确移取 75 μL 待测液（见 7.2.2） ，加入检测卡加样孔中。 8.4 检测卡加样后，水平静置 15 min 反应，然后在 3 min 内将检测卡插入免疫荧光分析仪，仪器将自 动进行检测。 8.5 免疫荧光分析仪完成数据读取、分析，免疫荧光分析仪自动显示试样中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的含 量并保存检测结果。 8.6 若免疫荧光分析仪的显示值＞2500 μg/kg，需移取 100 μL 待测液（见 7.2.2） ，加入 300 μL 提取液， 充分混匀后取 100 μL 至另一离心管中，加入 100 μL 三级水混匀，再加入 200μL 稀释缓冲 液，充分混匀，按照 8.2～8.5 进行测定，若显示值仍＞2500 μg/kg，则按 8.6 重复测定，直至显示值 ≤2500 μg/kg。 8.7 本方法检出限为 50 μg/kg。 9 注意事项 不同厂家超导量点免疫荧光定量检测卡及免疫荧光分析仪的使用方法可能不同，应按照产品使用说 明中规定的方法进行操作。 10 结果表述 试样中脱氧雪腐镰刀菌烯醇的含量由免疫荧光分析仪自动计算并显示，单位为μg/kg。 2 DB43/T 2347—2022 11 重复性 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的相对偏差不应超过 10％。 3 DB43/T 2347—2022 附 录 A （规范性） 超导量点免疫荧光快速定量检测卡性能要求及评价 A.1 准确性 采用 500 μg/kg、 1000 μg/kg 和 3000 μg/kg 3 个浓度水平的脱氧雪腐镰刀菌烯醇实物标准样品， 每个浓度平行测定不低于 6 次。计算检测卡检测结果与实物标准样品的相对偏差，3 个浓度的相对偏差 均应控制在-10％～+10％之间。 A.2 精密度 采用 1000 μg/kg 脱氧雪腐镰刀菌烯醇的实物标准样品，平行测定不低于 6 次，计算检测卡批内变 异系数，变异系数应≤10％。 A.3 批间稳定性 采用 1000 μg/kg 脱氧雪腐镰刀菌烯醇的实物标准样品，随机选取至少 6 个批次产品，每个批次产 品测定不低于 2 次，批内测定取其平均值，计算检测卡批间变异系数，变异系数应≤10％。 A.4 批内稳定性 采用 1000 μg/kg 脱氧雪腐镰刀菌烯醇的实物标准样品，随机选取 1 个批次产品测定，平行测定不 低于 6 次，计算检测卡批内变异系数，变异系数应≤10％。 4